實(shí)驗(yàn)二-萌發(fā)麥苗淀粉酶活性的測定

1、實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二萌發(fā)麥苗淀粉酶活性的測定萌發(fā)麥苗淀粉酶活性的測定生物112周泓兆1102040226一、研究背景及目的酶作為生物體內(nèi)最重要的催化劑，其活性尤其受到關(guān)注。在這次實(shí)驗(yàn)中，我們將對(duì)一些經(jīng)典經(jīng)典酶活力測定實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析，對(duì)比其思路與設(shè)計(jì)差異，了解測定酶活力的基本方向和實(shí)驗(yàn)技巧。完成小麥萌發(fā)過程中淀粉酶活力的測定并分析測定結(jié)果是否合理。二、原理淀粉在淀粉酶的催化作用下生成麥芽糖。本實(shí)驗(yàn)便是通過測定淀粉酶在一定時(shí)間內(nèi)分解淀粉所產(chǎn)生的麥芽糖

2、總量來測定酶的活性。根據(jù)其催化產(chǎn)物的特點(diǎn)和現(xiàn)有測定方法規(guī)定酶活力單位為：每分鐘每克鮮重麥種所催化生成的麥芽糖毫克數(shù)（毫克麥芽糖克1鮮重分1）。本實(shí)驗(yàn)涉及α淀粉酶與β淀粉酶，我們可通過鈍化β淀粉酶的方法單獨(dú)測定α淀粉酶的活性。本實(shí)驗(yàn)所使用的35－二硝基水楊酸法是一種對(duì)還原糖定量測定的方法。還原糖和堿性二硝基水楊酸試劑一起共熱，產(chǎn)生一種棕紅色的氨基化合物，在一定的濃度范圍內(nèi)，棕紅色物質(zhì)顏色的深淺程度與還原糖的量成正比。因此，我們可以測定樣品

3、中還原糖以及總糖的量。麥芽糖是還原性糖，可用該方法對(duì)其含量進(jìn)行測定。三、儀器與試劑1.儀器：TDL40B離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），722光柵分光光度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司），DKS24型電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司），JP100架盤藥物天平（常熟市雙杰測試儀器廠），HCTP12A1架盤藥物天平（北京醫(yī)用天平廠）2.試劑：麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)液，pH5.6的檸檬酸緩沖液，35二硝基水楊酸溶液，0.4MNaOH，F(xiàn)olin酚試劑

4、甲，F(xiàn)olin酚試劑乙，標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白溶液（1mgml）3.材料：萌發(fā)的小麥種子（芽長約1cm）四、實(shí)驗(yàn)方法操作步驟1、酶液的制備：稱取兩克萌發(fā)的小麥種子（芽長一厘米左右），置研缽中加少量石英砂，以蒸餾水作為勻漿液，研磨成勻漿，轉(zhuǎn)移到50ml容量瓶中至40ml左右，室溫浸提1520分鐘，浸提充分后定容至刻度，混勻后3500rmin離心20min，取上清液備用（初始酶液）。2、取15支試管，分別編號(hào)α測定管1、α測定管2、α對(duì)照管1、α

5、對(duì)照管2、αβ測定管1、αβ測定管2、αβ對(duì)照管1、αβ對(duì)照管2與1、2、3、4、5、6、7。3、在α測定管1、α測定管2、α對(duì)照管1、α對(duì)照管2中各加入酶液1ml在70℃恒溫水浴中準(zhǔn)確加熱15min，取出后立即在冰浴中冷卻至室溫或更低。取出后分別在四支試管中各加入1mlpH5.6檸檬酸緩沖液，置于40℃恒溫水浴中準(zhǔn)確保溫15min。之后向兩支對(duì)照管中各加入4ml0.4MNaOH，再向各管分別加入40℃下預(yù)熱的淀粉溶液2ml，搖勻，立即

6、于40℃水浴中準(zhǔn)確保溫5min，然后向兩支測定管分別迅速加入4ml0.4MNaOH，搖勻備用。4、取制備的酶液5ml，放入100ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，混合均勻后，在α六、結(jié)果計(jì)算與討論分析根據(jù)數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得：管號(hào)α測定管1α測定管2α對(duì)照管1α對(duì)照管2αβ測定管1αβ測定管2αβ對(duì)照管1αβ對(duì)照管2麥芽糖濃度（mgml）0.4450.2410.5070.274結(jié)果計(jì)算：α淀粉酶活性（毫克麥芽糖克1鮮重