進(jìn)出口動(dòng)物源性食品中三聚氰胺快速檢測(cè)方法—elisa編制說(shuō)明

1、1《進(jìn)出口動(dòng)物源性食品中三聚氰胺快速檢測(cè)方法進(jìn)出口動(dòng)物源性食品中三聚氰胺快速檢測(cè)方法ELISA法》編制說(shuō)明編制說(shuō)明一、標(biāo)準(zhǔn)制定的任務(wù)來(lái)源及意義本標(biāo)準(zhǔn)的制定工作是由中華人民共和國(guó)國(guó)家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì)提出并歸口，由北京出入境檢驗(yàn)檢疫局研究起草，計(jì)劃編號(hào)為2008B184。本標(biāo)準(zhǔn)制定了進(jìn)出口動(dòng)物源性食品中三聚氰胺快速檢測(cè)方法ELISA法。三聚氰胺（英文名Melamine，CAS:108781，分子式C3N6H6）是一種用途廣泛的有機(jī)化工

2、原料，禁止在食品和動(dòng)物食品中添加，但因其結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)氨基氮而被一些不法商販添加到植物蛋白中以提高蛋白的含量。其危害最早源于2007年3月美國(guó)發(fā)生的寵物貓、狗中毒死亡事件。經(jīng)美國(guó)FDA證實(shí)，貓、狗死亡是寵物食品的原料受三聚氰胺污染，并指出其中小麥蛋白原料來(lái)自中國(guó)，由此引起了國(guó)內(nèi)外對(duì)三聚氰胺的高度關(guān)注。三聚氰胺一方面可能殘留于食用動(dòng)物組織，進(jìn)而污染畜產(chǎn)品食品；另一方面，三聚氰胺也可以直接污染小麥、大米等谷物食品。無(wú)論何種污染途徑，都可能危

3、害人類健康、甚至造成人類中毒、死亡的危險(xiǎn)。2008年9月16日，國(guó)家質(zhì)檢總局公布了全國(guó)嬰幼兒配方奶粉22家生產(chǎn)企業(yè)的69批次產(chǎn)品檢出了含量不同的三聚氰胺的檢查結(jié)果，再次將三聚氰胺聚焦為食品安全檢測(cè)中的重要檢測(cè)對(duì)象。三聚氰胺在食品中的限量值，目前僅針對(duì)乳和乳制品。對(duì)于嬰幼兒配方奶粉限量值我國(guó)和香港地區(qū)、澳大利亞、新西蘭、加拿大以及歐盟都制定在1mgkg，美國(guó)沒(méi)有對(duì)嬰幼兒配方奶粉制定一個(gè)控制的限量；我國(guó)對(duì)其他乳和含乳15%的食品限量值為2.

4、5mgkg。三聚氰胺傳統(tǒng)的檢測(cè)方法有重量法、升華法，但方法檢測(cè)限不能滿足要求。近來(lái)發(fā)展起了色譜法。我國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布《飼料中三聚氰胺的測(cè)定》公告，確定了飼料中三聚氰胺測(cè)定的農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NYT13722007，該標(biāo)準(zhǔn)采用高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法（GCMS），HPLC法最低定量限為2mgkg，GCMS法最低定量限為0.05mgkg。2008年10月7號(hào)，國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)批準(zhǔn)發(fā)布了《原料乳與乳制

5、品中三聚氰胺檢測(cè)方法》（GBT223882008）國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定了高效液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜質(zhì)譜質(zhì)譜法三種方法為三聚氰胺的檢測(cè)方法，檢測(cè)定量限分別為2mgkg、0.05mgkg和0.01mgkg。2008年10月15日，又發(fā)布了《原料乳中三聚氰3五、方法的主要技術(shù)指標(biāo)1、方法檢測(cè)限研究建立的三聚氰胺直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)方法，其標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性范圍為20～500gL。經(jīng)加標(biāo)回收試驗(yàn)，針對(duì)嬰兒奶粉和嬰兒豆奶粉的檢測(cè)限≤1.

6、0mgkg，液態(tài)奶及含乳巧克力、乳清粉、酸奶等含乳食品樣品經(jīng)前處理及掩蔽劑稀釋后的檢測(cè)限≤2.5mgkg，均滿足目前三聚氰胺的安全限量標(biāo)準(zhǔn)（MRLs）的要求，即針對(duì)嬰幼兒為1.0mgkg和其他乳品和含乳制品為2.5mgkg。同時(shí)本方法還使用于肉類（雞、魚肉）、雞蛋和醬油。2、方法精密度嚴(yán)格按本標(biāo)準(zhǔn)所確定的操作程序，對(duì)三聚氰胺檢測(cè)進(jìn)行了精密度的測(cè)試，分別以板內(nèi)變異和板間變異表示。取六個(gè)含不同三聚氰胺濃度的實(shí)驗(yàn)樣品，進(jìn)行ELISA分析，每個(gè)

7、濃度實(shí)驗(yàn)樣品作10個(gè)復(fù)孔，對(duì)測(cè)得抑制率（IC）進(jìn)行分析，變異系數(shù)均＜10%。取六個(gè)不同濃度的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行ELISA分析，每個(gè)濃度每天作兩次分析，綜合5天測(cè)得的抑制率（IC）吸光度值進(jìn)行分析，變異系數(shù)均＜10%。3、方法準(zhǔn)確度選擇10種不含三聚氰胺的樣品，分別添加三聚氰胺至樣品中3個(gè)不同含量水平，提取后采用直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)，計(jì)算樣品加標(biāo)回收率，以加標(biāo)回收率表示檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度。結(jié)果顯示，回收率均在81128%之間（見(jiàn)表