玉米高效轉(zhuǎn)基因體系的建立及其應用

1、探討玉米高效轉(zhuǎn)基因體系的建立及其應用探討玉米高效轉(zhuǎn)基因體系的建立及其應用摘要：植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)是我們改良其品質(zhì)能夠獲得優(yōu)良性狀的轉(zhuǎn)基因作物和功能的主要方法，通過采用這種方法進一步提高植物轉(zhuǎn)基因的效率，為明確nas基因在玉米代謝中的作用打下了堅實的基礎。關(guān)鍵詞：玉米；高效轉(zhuǎn)基因；體系1農(nóng)桿菌介導的玉米轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)建立與優(yōu)化轉(zhuǎn)基因技術(shù)在玉米育種中運用很廣泛，植物基因工程為植物的遺傳改良開拓了廣闊的前景，轉(zhuǎn)基因作物重新組合能夠增強其抗逆性、抗病蟲

2、害和抗雜草性。植物基因工程是現(xiàn)代生物學研究的重要手段，如今轉(zhuǎn)基因玉米的研究已取得顯著進展，常用玉米轉(zhuǎn)基因的方法已改良了玉米的某些性狀，其中基因槍法是klein在1989年第1次使用其進行轉(zhuǎn)化玉米，花粉管通道法是授粉后使外源基因沿花粉管滲入，根癌農(nóng)桿菌介導玉米遺傳轉(zhuǎn)化成功率高，效果好，除此之外還有peg介導法、超聲波法和電擊法等。農(nóng)桿菌介導轉(zhuǎn)化玉米的研究歷程經(jīng)歷了三個階段：第一階段證明農(nóng)桿菌能夠侵染玉米，第二階段有轉(zhuǎn)化細胞但沒有獲得轉(zhuǎn)基因

3、植株，第三階段獲得轉(zhuǎn)基因植株且有分子雜交憑據(jù)。農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)基因受體包括原生質(zhì)體（轉(zhuǎn)化效率高、嵌合體少，適宜各種轉(zhuǎn)化系統(tǒng)）、愈傷組織，玉米胚性愈傷組織的誘導明顯受到基因型的限制、叢生芽，每個不定芽都有形成幼苗的能力、尼克酰胺廣泛存在于植物體內(nèi)，在植物吸收鐵的整合策略中起著很大作用。而在氧化還原策略中植物向根際土壤分泌氫離子以降低土壤ph值。2實驗與方法實驗材料包括植物材料，即野生型玉米和突變體玉米，采用的質(zhì)粒和菌株以提高水稻轉(zhuǎn)基因效率為

4、益，以此構(gòu)建玉米鐵營養(yǎng)相關(guān)基因的干涉載體部分。酶和試劑采用寶生物工程(大連)有限公司的產(chǎn)品。采用合適的培養(yǎng)大腸桿菌及農(nóng)桿菌培養(yǎng)基，通過rnai及轉(zhuǎn)基因技術(shù)分析玉米鐵營養(yǎng)相關(guān)基因。在所需量的ctab抽提液中加入2—疏基乙醇，通過gatewaycloningsystem構(gòu)建rnai載體，用pfu酶將pcr產(chǎn)物補平，用dna相關(guān)技術(shù)獲得純化的pcr產(chǎn)物，使用topocloning轉(zhuǎn)化大腸桿菌，然后使用中間載體單克隆的驗證及質(zhì)粒的測序，采用堿裂