發(fā)酵染菌原因分析

1、發(fā)酵染菌原因分析發(fā)酵染菌原因分析第一部分：基礎(chǔ)知識(shí)1）雜菌的類型空氣中的微生物大多數(shù)是細(xì)菌和芽孢還有一定數(shù)量的霉菌、酵母和病毒。細(xì)菌的大小有零點(diǎn)幾微米至幾個(gè)微米.根據(jù)以上特點(diǎn)我們應(yīng)得出如下結(jié)論：A：這些微生物在空氣中極少單獨(dú)游離存在基本上是附著于灰塵、液滴等微粒的表面上。B：介質(zhì)過(guò)濾除菌就是把空氣中的各種微粒和極少量的游離微生物捕集起來(lái)予以除掉。因此我們通常所用的空氣過(guò)濾器為什么0.3u可以保證無(wú)菌發(fā)酵生產(chǎn)的原因。2）無(wú)菌檢查與染菌的處

2、理在抗生素生產(chǎn)過(guò)程中為了及早發(fā)現(xiàn)染菌并進(jìn)行恰當(dāng)處理保證生產(chǎn)正常進(jìn)行對(duì)菌種制備、種子罐、發(fā)酵罐的接種前后和培養(yǎng)過(guò)程中須要按工藝規(guī)程要求按時(shí)取樣，進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)。A：無(wú)菌檢查培養(yǎng)液是否污染雜菌可從三個(gè)方面進(jìn)行分析：a:無(wú)菌試驗(yàn)b:培養(yǎng)液的顯微鏡拉查c:培養(yǎng)液的生化指標(biāo)變化情況。其中無(wú)菌試驗(yàn)是判斷染菌的主要依據(jù)。無(wú)菌試驗(yàn)現(xiàn)在采用的無(wú)菌試驗(yàn)方法有肉湯培養(yǎng)法、雙碟培養(yǎng)法、斜面培養(yǎng)法。其中以酚紅肉湯培養(yǎng)法和雙碟培養(yǎng)法結(jié)合起來(lái)進(jìn)行無(wú)菌檢查用的較多。(1

3、)肉湯培養(yǎng)法直接用裝有酚紅肉湯的無(wú)菌試管取樣然后放入37℃恒溫室(箱)內(nèi)培養(yǎng)。定時(shí)觀察試管內(nèi)肉湯培養(yǎng)基的顏色變化同時(shí)進(jìn)行顯微鏡觀察。（2）斜面培養(yǎng)法先用空白無(wú)菌試管取樣然后在無(wú)菌條件下接種于斜面培養(yǎng)基上置于37℃恒溫室(箱)內(nèi)培養(yǎng)。定時(shí)觀察有無(wú)雜菌菌落生長(zhǎng)。。（3）雙碟培養(yǎng)法種子罐樣品先取入肉湯培養(yǎng)基中然后在無(wú)茵條件下在雙碟培養(yǎng)基上面劃線剩下的肉湯培養(yǎng)物在恒溫室(箱)內(nèi)培養(yǎng)6小時(shí)后復(fù)劃線一次發(fā)酵罐培養(yǎng)液直接取入空白無(wú)菌試管中于37℃下培

4、養(yǎng)6小時(shí)后在雙碟培養(yǎng)基上劃線。24小時(shí)內(nèi)的雙碟定時(shí)在燈光下檢查有無(wú)雜菌生長(zhǎng)。24小時(shí)~48小時(shí)的雙碟1天檢查一次以防生長(zhǎng)緩慢的雜菌漏檢。正常生產(chǎn)過(guò)程中種子罐和發(fā)酵罐每隔8小時(shí)取樣一次進(jìn)行無(wú)菌檢查。該方法經(jīng)常用于單菌落挑選，可以從染有雜菌的培養(yǎng)液中經(jīng)多次劃線挑取單菌落進(jìn)行分離培養(yǎng)，得到純種的種子。無(wú)菌試驗(yàn)的結(jié)果一般需要8~12小時(shí)才能作出判斷。為了縮短判斷時(shí)間有時(shí)向培養(yǎng)基中加入赤霉素、對(duì)氨基苯甲酸等生長(zhǎng)激素以促進(jìn)雜菌的生長(zhǎng)。B:染菌的判斷

5、培養(yǎng)基的染菌判斷是錯(cuò)綜復(fù)雜的工作又是一種細(xì)微觀察、認(rèn)真分析的王作。(二)污染噬菌體的處理抗生素等產(chǎn)品發(fā)酵過(guò)程中有時(shí)出現(xiàn)噬菌體污染輕者造成生產(chǎn)能力大幅度下降重者造成停產(chǎn)。一般噬菌體污染后往往出現(xiàn)發(fā)酵液突然轉(zhuǎn)稀泡沫增多早期鏡檢發(fā)現(xiàn)菌體染色不均勻，在較短時(shí)間內(nèi)菌體大量自溶最后僅殘留菌絲斷片平皿培養(yǎng)出現(xiàn)典型的噬菌斑溶氧濃度回升提前營(yíng)養(yǎng)成分很少消耗產(chǎn)物合成停止等現(xiàn)象。發(fā)酵過(guò)程中污染噬菌體后，一般做如下處理：1.發(fā)酵液用高壓蒸汽滅菌后放掉嚴(yán)防發(fā)酵液

6、任意流失；2.全部停產(chǎn)對(duì)環(huán)境進(jìn)行全面的清洗和消毒斷絕噬菌體的寄生基礎(chǔ)；3.更換生產(chǎn)菌種不斷篩選抗噬菌體菌種防止噬菌體的重復(fù)污染。污染烈性噬菌體時(shí)出現(xiàn)上述現(xiàn)象。如果污染溫和噬菌體時(shí)其反應(yīng)溫和平皿培養(yǎng)不出現(xiàn)明顯的噬菌斑只出現(xiàn)部分菌體自溶生化指標(biāo)變化不顯著生產(chǎn)能力降低對(duì)生產(chǎn)的危害亦是嚴(yán)重的但不易被發(fā)現(xiàn)。防止溫和噬菌體污染的方法同上所述。第二部分：染菌原因分析染菌是發(fā)酵工業(yè)的大敵不制服染菌就不能實(shí)現(xiàn)優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)。在抗生素發(fā)酵生產(chǎn)中造成發(fā)酵染菌的原因

7、很多，分析染菌的原因是很困難的。但在眾多的原因分析中，從人、機(jī)、料、法、環(huán)各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行細(xì)致的分析.從多方面查找原因查出雜菌的來(lái)源采取相應(yīng)措施予以制服。一、染菌原因的分析。染菌的途徑多表現(xiàn)的現(xiàn)象多樣。因而追查雜菌的來(lái)源是困難的從現(xiàn)有的經(jīng)驗(yàn)可從下述幾千方面進(jìn)行分析。（一）從染菌的規(guī)模和時(shí)間分析在發(fā)酵過(guò)程中如果是種子罐和發(fā)酵罐同時(shí)大面積染菌雜菌的主要來(lái)源可能是空氣凈化系統(tǒng)如空氣過(guò)濾器失效或空氣管道滲漏造成的。其次考慮種子制備工序。如果只是發(fā)酵

8、罐大面積染菌除考慮空氣凈化系統(tǒng)帶菌外還要重點(diǎn)考查接種管道、補(bǔ)料系統(tǒng)。發(fā)酵培養(yǎng)基采用連續(xù)滅菌工藝時(shí)還要嚴(yán)格檢查連消系統(tǒng)是否帶入雜菌。如果是部分發(fā)酵罐在發(fā)酵早期染菌可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底或種子罐帶菌或接種管道滅菌不徹底造成的。如果是發(fā)酵的中后期染菌重點(diǎn)分析補(bǔ)料系統(tǒng)和加消沫劑系統(tǒng)，個(gè)別發(fā)酵罐連續(xù)染菌就從單個(gè)罐體查找雜菌來(lái)源如罐內(nèi)是否有“死角”或冷卻系統(tǒng)有滲漏。當(dāng)然還要檢查附件個(gè)別罐批的散在性染菌其原因很難追查要具體情況具體分析。（二）從雜菌類