生物本科畢業(yè)論文

1、銀杏葉提取物銀杏葉提取物EGBEGB對CClCCl4肝損傷小鼠的肝損傷小鼠的MDAMDA含量含量以及以及SODSOD活力的影響活力的影響學生：杜改亮指導教師：劉春卉（太原師范學院生物系20061312班學號：2006131201山西太原030031）摘要目的：探討銀杏葉提取物EGB(黃酮類)對CCl4肝損傷小鼠以MDA含量及SOD活力的影響，生產出一種有效保護肝臟的藥物。方法：清潔級昆明種小鼠♀♂兼用，隨機分為空白對照組、吐溫對照組、模

2、型對照組、聯苯雙酯陽性對照組、實驗組（銀杏葉提取物低濃度、銀杏葉提取物中濃度、銀杏葉提取物高濃度），用四氯化碳皮下注射法建立慢性肝損傷模型，分別用生理鹽水或藥物灌胃治療。檢測肝組織中脂質過氧化物丙二醛（MDA）的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力并加以探討。結果：EGB能顯著升高CCl4所致急性肝損傷小鼠其SOD活力，并可顯著降低該模型小鼠肝組織中MDA的含量。結論：銀杏葉提取物(黃酮類)對此模型小鼠的肝損傷具有顯著的保護作用，可能與

3、降低、抑制脂質過氧化反應以及抗自由基損傷有關.關鍵詞銀杏葉提取物CCl4肝損傷小鼠MDA含量；SOD活力近幾年來由于大量有害物質的產生，人們可能在不經意間，接觸大量有害物質，例如CCL4CCL4致急性中毒性肝炎、肝中毒四氯化碳進入肝細胞后，使線粒體膜的脂質溶解，從而影響線粒體的結構和功能，使酶蛋白質的合成減少，造成酶的破壞，因而影響代謝功能和能量的合成，致死。新觀點認為細胞壞死的關鍵是由于四氯化碳抑制了細胞膜上鈣泵活性，大量鈣離子內流，

4、堆積于細胞內的結果。此種動物模型可觀察到急性肝炎的糖、脂肪、胞色素等方面的代謝障礙、肝解毒功能障礙，磺溴酚納滯留血清，轉氨酶明顯升高，迅速出現營養(yǎng)不良、肝脂肪化變性及壞死等形態(tài)學變化。肝小葉中央壞死和肝細胞脂肪變性是其主要病變。有一種陽性藥聯苯雙酯，它是一種治療肝炎的降酶藥物，即可減輕因CCL4所致的肝臟損害，對CCL4所致的肝臟微粒體脂質過氧化，CCL4代謝為CO有抑制作用，對肝臟具有保護作用，雖治療肝臟的藥物很多，但效果不是很好。近

5、幾年國內外學者對銀杏葉藥理進行了大量的研究，銀杏（Ginkgobiloba）系銀杏科銀杏屬落葉喬木，為中生代孑遺的稀有物種，被稱為被子植物的“活化石”是我國特有植物。20世紀以來，發(fā)現其主要藥用成分為黃酮類和萜內酯類化合物。藥理試驗表明銀杏黃酮類化合物有使冠狀血管及其他血管擴張的作用。銀杏黃酮有抗自由基、抑制脂質過氧化作用?？芍苯忧宄?2一、.OH一，捕捉脂化自由基、脂氧自由基和烷自由基等，通過對這些自由基起一種氫原子供用而終止自由基連

6、鎖反應鏈，從而阻止和抑制氧自由基反應和脂質過氧化的病理性加劇，減輕氧自由基和脂質過氧化損傷。推測EGB對肝損傷也有保護作用。本實驗就是通過設計一系列的對比實驗，研究EGB是否確實有此作用。1材料與方法1.1實驗材料2機體通過酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產生氧自由基，后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸（PUFA），引發(fā)脂質過氧化作用，并因此形成脂質過氧化物。如：醛基（丙二醛MDA）、酮基、羥基、羰基、氫過氧基可內過氧基，以及新的氧自由基等。脂質過氧化

7、作用不公把活性氧轉化成活性化學劑，即非自由基性的脂類分解產物，而且通過鏈式或鏈式支鏈反應，放大活性氧的作用。因此，初始的一個活性氧能導致很多脂類分解產物的形成，這些分解產物中，一些是無害的，另一些則能引起細胞代謝及功能障礙，甚至死亡。氧自由基不但通過生物膜中多不飽和脂肪酸（PUFA）的過氧化引起細胞損傷，而且還能通過脂氫過氧化物的分解產物引起細胞損傷。因而測試MDA的量常?？煞从硻C體內脂質過氧化的程度，間接地反映出細胞損傷的程度。MDA

8、的測定常常與SOD的測定相互配合，SOD活力的高低間接反應了機體清除氧自由基的能力，而MDA的高低又間接的反應了機本細胞受自由基攻擊的嚴重程度，通過SOD與MDA的結果分析有助于醫(yī)學、生物學、藥理及工農業(yè)生產的發(fā)展。1.4.1.2MDA試劑盒測試原理：過氧化脂質降狗解產物中的丙二醛（MDA）可與硫代巴比妥酸（TBA）縮合，形成紅色產物，在532nm處有最大吸收峰。因底物為硫代巴比妥（TBA）所以此法稱TBA法。1.4.1.3測試所需儀器

9、設備可見光分光光度計，可調到95℃左右的恒溫水浴箱（或者鋁鍋內放幾個去掉蓋子的易拉罐，將罐壁及底部穿數十個孔，以便水的進入，用來代替水浴箱。），離心機。1.4.1.4100T試劑盒組成與配制1.4.1.4.1試劑一：液體20ml1瓶，室溫保存。（天冷時會凝固，每次測試前適當水浴加溫以加速溶解，直至透明方可應用）。1.4.1.4.2試劑二：液體12ml1瓶，用時每瓶加340ml雙蒸水混勻，4℃冷藏（注意不要碰到皮膚上）。1.4.1.4.3

10、試劑三：粉劑1支，用時將粉劑加入到90℃100℃的熱雙蒸水60ml中，（在溶解過程中可適當加熱），充分溶解后用雙蒸水補足至60ml再加冰醋酸60ml，混勻，配好的試劑避光冷藏。（冰醋酸自備注）1.4.1.4.4標準品：10nmolml四乙氧基丙烷5ml1瓶，4℃冷藏。測試盒冷藏至少可保存一年。[注]：冰醋酸又名乙酸，一般的醫(yī)藥公司、化劑公司均有售，要購AR級即分析純級的乙酸較好，乙酸含量為99%以上。1.4.1.550T試劑盒組成與配制

11、：1.4.1.5.1試劑一：液體10ml1瓶，室溫保存。（天冷時會凝固，每次測試前適當水浴加溫以加速溶解，直至透明方可應用）。1.4.1.5.2試劑二：液體6ml1瓶，用時每瓶加340ml雙蒸水混勻，4℃冷藏（注意不要碰到皮膚上）。1.4.1.5.3試劑三：粉劑1支，用時將粉劑加入到90℃100℃的熱雙蒸水30ml中，（在溶解過程中可適當加熱），充分溶解后用雙蒸水補足至30ml再加冰醋酸30ml，混勻，配好的試劑避光冷藏。（冰醋酸自備注