革蘭陰性桿菌的耐藥性研究

1、非發(fā)酵G-桿菌(nonfermentative G- Bacilli),非發(fā)酵菌是一群需氧、無芽孢、不利用糖或僅能氧化分解糖類做為能量來源的G-桿菌。通常所講的非發(fā)酵菌指在KIA中24小時內(nèi)表面能夠生長，在底部不生長的需氧G-桿菌。非發(fā)酵菌與其它苛養(yǎng)或非糖發(fā)酵的G-桿菌之間的界限只是傳統(tǒng)意義上的，并不是根據(jù)明確的遺傳或表型特點來劃分。多為條件致病菌，近年來日益增多，尤其是醫(yī)院感染,分類與命名,非發(fā)酵G-桿菌被分成6個科：假單胞

2、菌科：根據(jù)rRNA-DNA同源性分為5個rRNA群 1．rRNAⅠ群/假單胞菌屬2．rRNAⅡ群/伯克霍爾德菌屬3．rRNAⅢ群/叢毛單胞菌屬、食酸菌屬4．rRNAⅣ群/短波毛單胞菌屬5．rRNAⅤ群/窄食單胞菌屬6．其它：鞘氨醇單胞菌屬、希瓦菌屬等產(chǎn)堿桿菌科：產(chǎn)堿桿菌屬黃桿菌科：華麗桿菌屬莫拉菌科：不動桿菌屬、莫拉菌屬甲基球菌科根瘤菌科,非發(fā)酵菌的基本鑒定要求,缺少糖發(fā)酵的證據(jù)，通常是在KIA或TSI培養(yǎng)基

3、中無酸產(chǎn)生，斜面和底部均呈紅色。MAC上生長很差或不生長氧化酶+（不動桿菌、嗜麥芽窄食單胞菌、唐菖蒲伯克菌、淺黃華麗單胞菌、棲稻黃素單胞菌-），但并非所有氧化酶+的G-桿菌都是非發(fā)酵菌。動力：多為+，但多為專性需氧，故半固體培養(yǎng)基中不明顯，宜用直接動力觀察或染色法,非發(fā)酵菌重要的鑒定試驗,葡萄糖利用（O/F試驗）: O/F培養(yǎng)基蛋白胨/糖類為1:5而不同于發(fā)酵菌的1:2。氧化酶試驗：多為+動力：半固體培養(yǎng)基應(yīng)只穿刺到頂部4mm

4、，在培養(yǎng)4-6小時后首次觀察結(jié)果，24和48小時后再次觀察結(jié)果。更準(zhǔn)確的方法是濕片法和鞭毛染色，鞭毛類型有重要意義。色素形成：非發(fā)酵菌可形成多種色素，有助于菌種的鑒定。,非發(fā)酵菌重要的鑒定試驗（續(xù)）,硝酸鹽還原/產(chǎn)氣：將硝酸鹽還原成亞硝酸鹽，進(jìn)而釋放氮的生化過程。吲哚試驗：需用含色氨酸豐富的培養(yǎng)基，產(chǎn)吲哚黃桿菌、腦膜敗血黃桿菌、食酸叢毛單胞菌等+。硫化氫：腐敗希瓦菌是非發(fā)酵菌中唯一在KIA和TSI上產(chǎn)硫化氫的菌種。,,常見不發(fā)酵G

5、-桿菌的初步分群鑒定,O-F試驗,O/F培養(yǎng)基（蛋白胨和糖類的比例為1:5），溴甲酚紫指示劑，其中一管用石蠟密封，另一管暴露于空氣中,第一節(jié)、rRNAⅠ群 / 假單胞菌屬(Pseudomonas),直或微彎無芽孢G-桿菌， OXI+，動力+（一個或多個極鞭毛），嚴(yán)格需氧，氧化利用葡萄糖、觸酶+、 MAC生長，水溶性色素。本屬包括銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌、斯氏假單胞菌、門多薩假單胞菌、產(chǎn)堿假單胞菌和類產(chǎn)堿假單胞菌。,銅綠

6、 熒光 惡臭 斯氏 門多薩 類產(chǎn)堿 產(chǎn)堿,氧化酶 99 97 100 100 100 100 96 42℃生長 100 0 0 69 100 94 0硝酸鹽還原 98 19 0

7、 100 100 100 94熒光素 65 96 93 0 0 0 0精氨酸水解 100 97 100 0 100 78 12 明膠液化 82 100

8、 0 0 0 0 0葡萄糖 97 100 100 96 100 9 0木糖 90 100 100 93 75 18 0乳糖

9、 1 24 25 0 0 0 0麥芽糖 1 2 31 100 0 0 0甘露醇 70 53 25 89 0

10、 0 0鞭毛數(shù) 1 >1 >1 1 1 1 1,銅綠假單胞菌,分布廣泛，是非發(fā)酵菌中最具臨床意義的細(xì)菌，也是醫(yī)院內(nèi)感染最多見的細(xì)菌，主要引起條件感染。感染多發(fā)生于燒傷、急性白血病、器官移植病人及靜脈藥癮者，感染多位于潮濕部位，如氣管造口、留置的導(dǎo)管、創(chuàng)面、外耳道、角膜和滲出性皮

11、膚傷口處囊性纖維化病人呼吸道分離的銅綠假單胞菌具有生物膜（其產(chǎn)生的大量藻酸鹽包圍了菌體所致），導(dǎo)致本病的治療困難和高死亡率。其淡藍(lán)色膿性滲出物及綠膿素的生姜樣氣味具有特征性。,銅綠假單胞菌的耐藥性,對氨芐西林、安美汀、四環(huán)素、優(yōu)力新、一/二代頭孢菌素、頭霉素、大環(huán)內(nèi)酯類、磺胺等天然耐藥各種抗生素治療過程中都可能產(chǎn)生耐藥，耐藥率及多重耐藥株上升較快。耐藥機制生物膜及外膜障礙胞外滅活或鈍化酶：β-內(nèi)酰胺酶、PBP主動外排系統(tǒng)將

12、抗生素泵出胞外抗菌藥物作用靶位改變,,生物膜,生物膜由依靠胞外產(chǎn)物而吸附于固體表面的微生物集落構(gòu)成，并能結(jié)合有機和無機成分，形成包含復(fù)雜的理化過程和生物群落的相互作用。如正常菌群與上皮細(xì)胞表面受體結(jié)合而黏附，并分泌胞外多糖聚合物，使細(xì)菌以非常精細(xì)的方式相互粘連，形成膜狀物，能發(fā)揮屏障和占位性保護作用，使外來病菌不能定植而通過侵入門戶侵襲機體。,銅綠假單胞菌感染的控制,易感危重病人不應(yīng)安排在已有過銅綠假單胞菌感染的病房各種抗菌藥物、

13、溶液、軟膏、器械等應(yīng)避免被銅綠假單胞菌污染采取適當(dāng)?shù)姆中头椒▽Ω腥揪赀M(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查和監(jiān)控噬菌體治療：,銅綠假單胞菌的檢驗,標(biāo)本采集：血液、腦脊液、胸腹水、膿液、分泌液、痰、尿液、十二指腸引流液、糞便等； 醫(yī)院病區(qū)或手術(shù)室的空氣、水、地面、把手、醫(yī)療診斷器械及生活用品。標(biāo)本直接檢查：鏡檢為G-細(xì)長桿菌，動力+、端生單鞭毛Ag檢測：O/H- Ag分型核酸檢測：質(zhì)粒指紋圖譜分析、基因組限制酶/脈沖場凝膠電泳圖譜分析、P

14、CR分離培養(yǎng)：普通培養(yǎng)基經(jīng)18-24h形成圓形、扁平隆起、光滑濕潤菌落。大多數(shù)產(chǎn)生綠膿素或熒光素。少數(shù)可產(chǎn)生其他顏色色素，如紅膿素（紅色），黑膿素（棕色到黑色），青膿素（黃色）。 MAC經(jīng)18-24h形成微小無光澤半透明菌落， 48h菌落中心呈棕綠色；BAP有β溶血環(huán)；鑒定：氧化酶+，氧化分解葡萄糖、硝酸鹽還原⊕、木糖+，液化明膠+，吲哚-，枸櫞酸鹽+，精氨酸雙水解酶+。,形態(tài)學(xué)特性,細(xì)長G-桿菌， 極單鞭毛，,培養(yǎng)特性,嚴(yán)格需氧，

15、氧化利用葡萄糖、 MAC生長，最適生長溫度35℃，4℃不生長，42℃可生長在普通瓊脂平板上產(chǎn)生特征性的藍(lán)綠色水溶性綠膿素和黃綠色青膿素（熒光假單胞菌和惡臭假單胞菌也可產(chǎn)生）血平板上形成大而扁平，濕潤，邊緣不齊，有金屬光澤，有生姜氣味的灰綠色菌落，并形成透明溶血環(huán)有時可產(chǎn)生水滴樣菌落，無色素不溶血（囊性纖維化病人）,銅綠假單胞菌菌落特征（普通瓊脂平板）,銅綠假單胞菌菌落特征（血瓊脂平板）,銅綠假單胞菌的分型,藥敏分型血清學(xué)分型：菌

16、體O及H抗原噬菌體分型：質(zhì)粒指紋圖譜分析脈沖場凝膠電泳重復(fù)序列PCR,結(jié)合臨床感染癥狀進(jìn)行分析患者血、尿液及無菌體液中分離到銅綠假單胞菌，特別是反復(fù)檢出即可確定為感染病原菌。如無感染的臨床表現(xiàn)，應(yīng)作為正常菌群。,檢驗結(jié)果分析與報告,熒光假單胞菌,見于水和土壤中，都可作為咽部的正常菌群存在，是人類少見的條件致病菌熒光假單胞菌和污染的血液制品關(guān)系密切，可見于近期接受過血液制品而致菌血癥的患者。叢極鞭毛，產(chǎn)青膿素，但不能產(chǎn)綠膿

17、素， 4℃生長, 42℃ 不生長, 最適溫度25-30℃。,水溶性熒光素（青膿素）,第二節(jié) rRNAⅡ群 / 伯克霍爾德菌屬,所有rRNAⅡ群的細(xì)菌都被歸入一個新屬，伯克霍爾德菌屬(Burkholderia)。本屬菌包括13個種，其中偽馬勒伯克霍爾德菌B. pseudomallei、洋蔥伯克菌B. cepacia、唐菖蒲伯克氏菌B. gladioli和皮氏伯克菌B. pickettii與人類疾病相關(guān)本屬其他菌種與植物或動物有關(guān)而與人

18、類疾病無關(guān)。,偽馬勒伯克霍爾德菌,生長有特定的生態(tài)區(qū)域，存在于赤道南北緯20度之間的土壤和不流動的水中，主要在泰國和越南。本菌在美國主要是從越戰(zhàn)士兵和去東南亞的旅游者中發(fā)現(xiàn)，可致人或動物類鼻疽。大多數(shù)感染無癥狀，只能通過血清學(xué)診斷。本菌的一個特點是可潛伏感染，首次接觸多年后復(fù)發(fā)。傳播主要是通過呼吸道或破損的皮膚的直接接觸，對類鼻疽的明確診斷依靠對臨床標(biāo)本中本菌的分離和鑒定,偽馬勒伯克霍爾德菌,本菌在大多數(shù)實驗室常規(guī)培養(yǎng)基中易生長，

19、并產(chǎn)生皺縮形菌落，呈紅棕色，在形態(tài)上同斯氏假單胞菌有些相似，另外本菌還可產(chǎn)生刺激性泥土氣味,洋蔥伯克霍爾德菌,是一種植物病原菌，從80年代早期開始本菌作為條件致病菌出現(xiàn)，在慢性肉芽腫和囊性纖維化的病人中常引起高死亡率和肺功能的全面下降。本菌是非發(fā)酵菌中僅有的兩種賴氨酸脫羧酶+的細(xì)菌之一（另一種是嗜麥芽窄食假單胞菌），可從各種水源和潮濕表面分離到，能在某些消毒劑（如銨鹽、聚維酮碘、洗必泰等）中生長，也可生長于有氮源的蒸餾水中本菌對氨

20、基糖苷類抗生素耐藥，對TMP/SMZ敏感，因此常用此藥治療洋蔥伯克菌感染。,伯克霍爾德菌屬微生物學(xué)檢查法,標(biāo)本 ：膿液、血液、鼻液等 直接涂片鏡檢：熒光染色法、抗原檢測：LPS、蛋白質(zhì)共同Ag分離培養(yǎng)與鑒定：BAP、MAC,三、rRNAⅢ群,包括兩個菌屬：叢毛單胞菌屬Comamonas和食酸菌屬Acidovorax食酸叢毛單胞菌是本屬菌中最常從臨床標(biāo)本中分離到的，可通過OF果糖和甘露醇產(chǎn)酸、乙酰胺+而與其他菌相區(qū)別，還是產(chǎn)生桔黃

21、色吲哚反應(yīng)的唯一細(xì)菌,四、rRNAⅣ群 / 短波毛單胞菌屬,短波毛單胞菌屬B. revundimonas包括兩個菌種：缺陷短波毛單胞菌B. diminuta和泡囊短波毛單胞菌B.vesicularis具有一條短波（0.6-1μm）緊密螺旋的單極鞭毛。對大多數(shù)碳水化合物無反應(yīng)或反應(yīng)很弱，屬于產(chǎn)堿的假單胞菌泡囊短波毛單胞菌生長緩慢，通常需培養(yǎng)48小時才可見菌落，并產(chǎn)生深黃到桔黃的色素，通過七葉苷水解+而易與其他假單胞菌區(qū)別。,五、rRN

22、AⅤ群 /窄食單胞菌屬,窄食單胞菌屬（Stenotrophomonas）是一個新命名的菌屬，有2個菌種，嗜麥芽窄食單胞菌S. maltophilia和S. africana在1961年根據(jù)其鞭毛特征命名為嗜麥芽假單胞菌1983年根據(jù)核酸同源性和細(xì)胞脂肪酸組成等歸入黃單胞菌屬，命名為嗜麥芽黃單胞菌，但由于其無黃單胞菌素，無植物病原性，能在37℃生長，且為極叢鞭毛，與其他黃單胞菌不同1993年此菌命名為嗜麥芽窄食單胞菌,嗜麥芽窄食單胞

23、菌,分布廣泛，可引起條件感染，是臨床第三位最常見的非發(fā)酵菌，是一種重要的醫(yī)院獲得性病原體，本菌可分離于幾乎所有部位，最常見的是呼吸道可致多種疾病，包括肺炎、菌血癥、心內(nèi)膜炎、膽管炎、腦膜炎、尿道感染和嚴(yán)重的傷口感染等。危險因素：機械通氣、廣譜抗生素的預(yù)防性應(yīng)用、化療、插管和中性粒細(xì)胞減少等。,嗜麥芽窄食單胞菌,下列特征可用來推測性鑒定： 在血平板或麥康凱平板上生長良好氧化酶-O/麥芽糖產(chǎn)酸，但O/葡萄糖可-賴氨酸脫羧酶+一

24、些菌株產(chǎn)黃色色素抗生素敏感方式：對大多數(shù)抗生素耐藥，包括氨基糖苷類和碳青霉烯類，但對TMP/SMZ敏感。,嗜麥芽窄食單胞菌,嗜麥芽窄食單胞菌為有動力桿菌，具有叢極鞭毛，血平板上菌落粗糙呈淡黃色或淺綠色，有氨氣味。根據(jù) 賴氨酸脫羧酶試驗+和DNA酶+、氧化酶-可很容易與其他假單胞菌區(qū)別，本菌葡萄糖氧化緩慢，可快速氧化分解麥芽糖。本菌的一個重要特征是對氨基糖苷類抗生素、碳青霉烯類天然耐藥，但TMP/SMZ天然敏感。,第三節(jié) 不動

25、桿菌屬 Acinetobacter,開始被歸于奈瑟菌科，但最近又被歸入莫拉菌科。根據(jù)DNA-DNA雜交特征將不動桿菌屬分為25個基因種，但只有10個基因種有菌名：基因種1：乙酸鈣不動桿菌，主要分離自土壤基因種2：鮑曼不動桿菌基因種4：溶血不動桿菌基因種5：瓊氏不動桿菌基因種7：約翰遜不動桿菌基因種8：洛菲不動桿菌直或微彎無芽孢G-桿菌， OXI-，動力-（一個或多個極鞭毛），不發(fā)酵糖類、觸酶+、 MAC生長，水溶性色素

26、。,鮑曼不動桿菌,廣泛分布于自然界和醫(yī)院環(huán)境中，能在潮濕和干燥的表面生存，也可存在于健康人的皮膚、呼吸道和泌尿道，通常不致病，但對體弱者可引起感染。在臨床標(biāo)本中的分離陽性率居第二位，僅次于銅綠假單胞菌。能在大多數(shù)環(huán)境表面生存和獲得多重耐藥性，所以由本菌引起的醫(yī)院獲得性感染有增加的趨勢，最常見的是呼吸道、手術(shù)部位、應(yīng)用器械或ICU的住院患者。,鮑曼不動桿菌,所致疾病包括肺炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、皮膚和傷口感染、腹膜炎和尿道感染等。不動桿

27、菌對青霉素、氨芐青霉素和頭孢他啶均耐藥，大多數(shù)菌株對氯霉素耐藥，對氨基糖苷類抗生素耐藥的菌株也逐漸增多，不同菌株對二代和三代頭孢菌素耐藥性不同，所以每個分離菌株都應(yīng)進(jìn)行藥敏試驗。多重耐藥菌株最常多見于鮑曼不動桿菌和溶血不動桿菌。,不動桿菌屬檢驗程序,不動桿菌屬－－鑒定要點,G-球桿菌無動力氧化酶－硝酸鹽還原－KIA：底層斜面不變色注意與形態(tài)相似的奈瑟菌鑒別注意與不分解糖的產(chǎn)堿桿菌鑒別,鮑曼不動桿菌形態(tài)特征,G-球桿菌，常似雙

28、球菌，有時不易脫色，易誤認(rèn)+菌；,鮑曼不動桿菌革蘭染色,鮑曼不動桿菌生理學(xué)特征,血平板培養(yǎng)24小時后，菌落大小0.5-2mm，半透明到不透明，凸起，邊緣整齊，無色素形成；大多數(shù)菌株麥康凱平板上生長良好，呈無色或淡粉紅色嚴(yán)格需氧、OF試驗為產(chǎn)堿型、動力-、氧化酶-、硝酸鹽還原-,鮑曼不動桿菌菌落特征,,血平板培養(yǎng)24小時后，菌落大小0.5-2mm，半透明到不透明，凸起，邊緣整齊，無色素形成；,MAC上生長良好，呈無色或淡粉紅色,第四節(jié)

29、 產(chǎn)堿桿菌屬 Alcaligenes,產(chǎn)堿桿菌為氧化酶+的G-桿菌，麥康凱上生長，通過周鞭毛運動，在含蛋白的肉湯中產(chǎn)氨，不發(fā)酵任何糖類，OF為產(chǎn)堿型，多數(shù)生化反應(yīng)-。 有醫(yī)學(xué)意義的產(chǎn)堿桿菌屬主要有木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種 A.xylosoxidans subsp. Xylosoxidans木糖氧化產(chǎn)堿桿菌脫硝亞種A.xylosoxidans subsp. denitrificans糞產(chǎn)堿桿菌A. faecalis皮

30、氏產(chǎn)堿桿菌A. piechaudii,產(chǎn)堿桿菌屬,木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種通過使OF葡萄糖和OF木糖產(chǎn)酸而很容易和其他產(chǎn)堿桿菌區(qū)別，可從血、腦脊液、支氣管沖洗液和傷口等分離到，本菌可引起醫(yī)院內(nèi)感染，如使住院病人引起肺炎，菌血癥和腦膜炎等。木糖氧化產(chǎn)堿桿菌脫硝亞種較少從臨床標(biāo)本分離到，主要見于血、耳、腦脊液和尿。糞產(chǎn)堿桿菌大部分感染是條件致病，主要來自潮濕環(huán)境，如霧化器、呼吸機和灌洗液等，血、痰、尿是常見發(fā)現(xiàn)部位。,第五節(jié) 黃桿

31、菌屬Flavobacterium,自然存在于土壤、水、植物和糧食中，在醫(yī)院主要存在于有水的環(huán)境和潮濕表面，引起術(shù)后感染、敗血癥、新生及嬰幼兒腦膜炎等。在BAP上生長良好，菌落呈黃色。動力-、氧化酶+、吲哚-,華麗桿菌屬,自然存在于土壤、水、植物和糧食中，在醫(yī)院主要存在于有水的環(huán)境和潮濕表面，已引起醫(yī)院感染。腦膜膿毒華麗桿菌產(chǎn)生很淺的黃色素，是使人類致病最相關(guān)的菌種，對早產(chǎn)兒具有高度致病性，可致新生兒腦炎，此病的準(zhǔn)確診斷很重要，可在嬰

32、兒室引起流行，而且死亡率較高，此菌也可引起成人肺炎，主要是免疫力低下者。此菌對碳青霉烯類天然耐藥華麗桿菌在麥康凱上一般生長較弱或完全不生長。動力-、氧化酶-、吲哚+，產(chǎn)吲哚華麗桿菌是本屬臨床標(biāo)本中最常分離到的菌株，因其菌落呈深黃色所以很容易認(rèn)出,卡他布蘭漢菌,上呼吸道粘膜的正常菌群，常引起老年病人的下呼吸道感染G-雙球菌，血平板和巧克力培養(yǎng)基培養(yǎng)，菌落為不透明、干燥、紅棕色氧化酶(+)，觸酶(+)，不分解麥芽糖和葡萄糖，DNA酶

33、(+),莫拉菌屬Moraxella,與臨床有關(guān)的有缺陷莫拉菌、犬莫拉菌、非液化莫拉菌、亞特蘭大莫拉菌、林肯莫拉菌、苯丙酮酸莫拉菌、奧斯陸莫拉菌。DNA G+C為40～47.5％ 。能引起眼結(jié)膜炎、氣管炎、肺炎、腦膜炎、腦膿腫、心炎、心內(nèi)膜炎及泌尿生殖系統(tǒng)炎癥。近年來非液化莫拉菌引起腦膜炎及嬰幼兒菌血癥者日益多，應(yīng)引起高度重視。,Ｇ-球桿菌，雙短鏈狀排列，具有多形性。無鞭毛。營養(yǎng)要求較高，血瓊脂平板上生長，菌落無色不溶血。氧化酶+，觸

34、酶+，無動力，吲哚-，不分解糖類、丁酸酯酶+（與奈瑟菌鑒別）對青霉素類敏感，對頭孢類、四環(huán)素類、氨基糖苷類藥物均為敏感。,微生物學(xué)檢查,第六節(jié) 軍團菌屬Legionella,1976年美國費城爆發(fā)軍團病，1977年分離出細(xì)菌，1978年命名為嗜肺軍團菌L. pneumophila， 85%病例由嗜肺軍團菌引起。生存能力較強，在蒸餾水中存活100天以上，在污水中可存活1年，對熱和常用化學(xué)消毒劑敏感。軍團菌廣泛存在于土壤及自然和人工

35、的水環(huán)境中，尤其是在空調(diào)冷凝水中的檢出率最高，其次是土壤、河水、冷卻塔、醫(yī)院淋浴噴頭等，是醫(yī)院感染的重要病原菌之一。臨床表現(xiàn)多種多樣，高發(fā)于夏秋季，易侵犯患有慢性器質(zhì)性疾病或免疫功能低下者，最常見的是肺炎型。致病物質(zhì)：微莢膜、菌毛、毒素、多種酶臨床類型：流感樣型（輕癥型）、肺炎型（重癥型）、肺外感染（龐堤阿克熱 pontiac fever)免疫性：嗜肺軍團菌為胞內(nèi)寄生菌，細(xì)胞免疫在抗感染中起主要作用紅霉素治療首選,直接法熒光抗

36、體染色,軍團菌屬的檢驗,標(biāo)本：痰、血液、胸水、氣管分泌物等，處理：加溫或酸處理鏡檢：GS、熒光抗體染色分離培養(yǎng)：緩沖活性炭酵母瓊脂培養(yǎng)基（BCYE） 3～5天形成光滑型小菌落。血瓊脂、巧克力瓊脂和BCYE瓊脂上24小時內(nèi)生長不是軍團菌鑒定：色素，氧化酶，觸酶和β內(nèi)酰胺酶試驗血清學(xué)試驗：檢測病人血清中抗軍團菌lgM及l(fā)gG抗體做出特異性診斷。分子生物學(xué)試驗,軍團菌形態(tài),G-桿菌，常規(guī)染色不易著色，用Dieterle鍍銀法染成黑

37、褐色，Giemsa法染色染成紅色，因培養(yǎng)條件不同有明顯多形性，有長鞭毛，無芽孢，有微莢膜,生理學(xué)特性,培養(yǎng)：需氧菌，首次分離需5%CO2，營養(yǎng)要求嚴(yán)格，一般營養(yǎng)瓊脂和血瓊脂上不生長，須含有半胱氨酸和鐵離子，在緩沖活性炭酵母瓊脂培養(yǎng)基（BCYE）上3-5天可形成濕潤、有光澤灰白色菌落，初期外觀呈刻花玻璃樣花紋，繼續(xù)培養(yǎng)消失。生化反應(yīng)：在含糖培養(yǎng)基上不生長，氧化酶弱+，觸酶+，β內(nèi)酰胺酶+,藥物敏感試驗,臨床治療藥物為紅霉素，可加用利福平

38、，而氨基糖苷類抗生素、青霉素、頭孢菌素類抗生素對本菌無效。藥物敏感試驗不做為臨床常規(guī)化驗項目。,非發(fā)酵菌總結(jié),下面的原則有助于實驗室發(fā)現(xiàn)和鑒定非發(fā)酵菌 1、除了銅綠假單胞菌、馬勒伯克菲爾德菌、偽馬勒伯克菲爾德菌和腦膜膿毒華麗桿菌，非發(fā)酵菌的毒力一般較低，易于感染非發(fā)酵菌的特定環(huán)境和疾病因素包括：1）惡性腫瘤、導(dǎo)管插入術(shù)、氣管開口術(shù)、淋巴穿刺，透析、灌洗和瓣膜置換等。2）長期皮質(zhì)類固醇、抗生素和抗腫瘤治療。3）患有代謝性

39、或慢性感染性疾病4）燒傷、開放性傷口及各種滲出性損傷。,非發(fā)酵菌總結(jié),2、大多數(shù)非發(fā)酵菌在不同環(huán)境中都有其自然定植部位，可成為人類感染的潛在傳染源。1）醫(yī)院環(huán)境中的各種水源。這些液體經(jīng)常與住院病人的粘膜和其他身體部位發(fā)生直接接觸。2）各種儀器用具，如麻醉設(shè)備、鑷子、體溫計、紗布、拖把、毛巾等。3）身體的某些潮濕部位，如腹股溝、腋窩、肘窩及甲溝等在夏天易受感染。 4）各種家畜、寵物可致其主人感染。,非發(fā)酵菌總結(jié),3、某些非

40、發(fā)酵菌可引起特定的感染，敗血癥可由任何非發(fā)酵菌引起，而大部分非發(fā)酵菌可致肺炎或支氣管炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、尿道炎、手術(shù)和外傷后傷口感染、結(jié)膜炎等。4、臨床分離的G-桿菌，如血平板上菌落小，麥康凱平板上不生長或生長差，KIA或TSA培養(yǎng)基斜面和底部均無改變，氧化酶+可懷疑為非發(fā)酵菌。5、很多非發(fā)酵菌對抗生素具有某種方式的多重耐藥性，了解這些耐藥方式有助于提供此菌株屬于某種非發(fā)酵菌的最初線索。,常見菌種的鑒定,（一）排除法 臨床標(biāo)本

41、中最常見的非發(fā)酵菌是銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌和嗜麥芽窄食單胞菌。大部分菌株只需通過觀察和少數(shù)生化實驗便可很容易鑒定，這種快速鑒定不僅可快速為臨床醫(yī)生提供信息，而且省時、省力、經(jīng)濟。,,氧化酶-，無動力不動桿菌屬,,氧化酶-，有動力洋蔥伯克菌(93%氧化酶弱+)唐菖蒲伯克菌淺黃華麗單胞菌棲稻黃素單胞菌少動鞘氨醇單胞菌(94%氧化酶+)嗜麥芽窄食單胞菌,氧化酶+，無動力動物傷口伯杰菌短穩(wěn)桿菌尿道寡源菌威克菌屬莫拉菌

42、屬華麗桿菌屬,氧化酶+，有動力銅綠假單胞菌產(chǎn)堿桿菌洋蔥伯克菌皮氏伯克菌類鼻疽伯克菌,非發(fā)酵菌總結(jié),復(fù)習(xí)思考題,名詞解釋：非發(fā)酵菌、O/F試驗、非發(fā)酵菌的共同特性有哪些？銅綠假單胞菌、鮑曼不動桿菌、嗜肺軍團菌等主要非發(fā)酵菌所致疾病與致病機理、微生物學(xué)檢驗方法與判斷依據(jù)是什么？噬菌體治療銅綠假單胞菌感染的原理是什么？非發(fā)酵菌與腸桿菌科的主要區(qū)別是什么？,推薦課外閱讀書目,聞玉梅，《現(xiàn)代醫(yī)學(xué)微生物學(xué)》，上海醫(yī)科大學(xué)出版社，