消毒劑使用及效力驗(yàn)證

1、消毒劑使用及效力驗(yàn)證,,2,能消除以細(xì)胞繁殖形態(tài)出現(xiàn)的微生 物污染的化學(xué)物質(zhì)。,消毒劑的習(xí)慣定義：,3,消毒劑的分類定義（USP29 ）,抗菌劑（Antiseptic)化學(xué)殺菌劑(Chemical Disinfectant)清潔劑(Cleaning Agent)消毒劑(Disinfectant)衛(wèi)生洗滌劑(Sanitizing Agent)殺孢子劑(Sporicidal Agent)滅菌劑(Sterilant

2、Agent),4,5,消毒劑配制,按供應(yīng)商的使用說(shuō)明進(jìn)行配制和儲(chǔ)存純化水、注射用水潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境使用，應(yīng)進(jìn)行除菌過(guò)濾。溫度提高，殺菌效力增大。效力驗(yàn)證時(shí)，在常溫下配制。,6,影響消毒劑效力的因素：,pH溫度，濃度材質(zhì)和附著物質(zhì)溶劑（水）接觸時(shí)間微生物的類型和數(shù)量,7,消毒劑作用機(jī)理,鈍化胞內(nèi)酶活性，影響細(xì)胞的正常代謝酚類阻斷物質(zhì)運(yùn)輸通道季銨鹽類（＋電荷），附著于細(xì)胞膜特定部分（－電荷）破壞微生物細(xì)胞（膜）的

3、結(jié)構(gòu)和功能醛類、含氯、過(guò)氧化物,8,微生物對(duì)消毒劑的耐受性,形成生物膜粘性多糖物質(zhì)消毒劑的相互作用中和反應(yīng)固有耐受性和概率殘存致死劑量,9,微生物抗力,由小到大排列一般為：細(xì)菌繁殖體真菌繁殖體真菌孢子病毒分枝桿菌細(xì)菌芽孢,10,消毒劑的選擇,需控制的微生物的類型和數(shù)量市售消毒劑的抗菌譜消毒劑的品牌濃度、使用方法和接觸時(shí)間待消毒物體的材質(zhì)和對(duì)消毒劑的兼容性可能影響殺菌效力的表面有機(jī)物數(shù)量反復(fù)使用，對(duì)設(shè)備

4、表面的腐蝕程度對(duì)操作者的安全性和清潔劑/其它消毒劑的相容性交替使用方案和對(duì)產(chǎn)品的影響,11,消毒劑驗(yàn)證的目的： 通過(guò)特定的微生物與某消毒劑在規(guī)定的使用濃度下，接觸規(guī)定的時(shí)間后，對(duì)微生物進(jìn)行培養(yǎng)、計(jì)數(shù)，考察消毒劑的消毒/殺菌效果。,12,消毒劑驗(yàn)證的內(nèi)容：,使用中稀釋檢測(cè)（use-dilution tests)對(duì)不同濃度下，對(duì)消毒劑的效力進(jìn)行篩選針對(duì)不同標(biāo)準(zhǔn)菌株和環(huán)境微生物，確認(rèn)接觸時(shí)間表面挑戰(zhàn)試驗(yàn)（surface c

5、hallenge tests)使用標(biāo)準(zhǔn)菌株和典型環(huán)境分離微生物選擇合適的濃度和接觸時(shí)間，進(jìn)行試驗(yàn)獲得挑戰(zhàn)微生物數(shù)量下降的對(duì)數(shù)值對(duì)使用新消毒劑前后環(huán)境微生物的檢出頻率和數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評(píng)估（無(wú)菌生產(chǎn)區(qū)域、GMP要求）,13,消毒劑驗(yàn)證步驟：第一步：在實(shí)驗(yàn)室對(duì)代表細(xì)菌在規(guī)定的使用濃 度和規(guī)定的作用時(shí)間進(jìn)行確認(rèn)。第二步：應(yīng)用不同材質(zhì)的載體，進(jìn)行模擬試驗(yàn)第三步：完成驗(yàn)證報(bào)告，形成SOP。,,14,驗(yàn)證

6、用菌種：金黃色葡萄球菌、銅綠色假單胞菌、沙門(mén)氏菌、大腸埃希菌、枯草桿菌、白色念珠菌、黑曲霉、環(huán)境分離菌。菌種選擇的原則:代表性,普遍性,標(biāo)準(zhǔn)菌種。(環(huán)境中常見(jiàn)的污染菌)。菌種的要求：不得超過(guò)5代。采用適宜的方法保存。,驗(yàn)證菌種：,15,挑戰(zhàn)微生物(USP 29),16,準(zhǔn)備性試驗(yàn)（一）,選擇適合的中和劑Letheen肉湯、D/E中和肉湯（酚類，季銨鹽類）、TAT肉湯基礎(chǔ)＋吐溫20＋卵磷脂＋胰蛋白胨,17,D/E中和肉湯（每升）,配

7、方胰蛋白胨 5 g酵母膏 2.5 g葡萄糖 10 g硫乙醇酸鈉 1 g硫代硫酸鈉 6 g亞硫酸氫鈉2.5 g吐溫 80 5 g卵磷脂 7 g溴甲酚紫 0.02 g最終 pH 7.6?0.2 于 25℃,18,準(zhǔn)備性試驗(yàn)（二）,中和劑毒性將10～100 CFU的微生物加入到中和劑中薄膜過(guò)濾，沖洗，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)與菌液對(duì)照組比較，回收率應(yīng)>70％,19,準(zhǔn)備性試驗(yàn)（三）,中和效力將消毒劑和中和劑混合（記錄時(shí)間）

8、加入10～100 CFU微生物薄膜過(guò)濾，沖洗，培養(yǎng)，計(jì)數(shù)與菌液對(duì)照組比較，回收率應(yīng)>70％,20,驗(yàn)證方法 - 薄膜過(guò)濾法,菌懸液和消毒劑直接混合，在不同的時(shí)間間隔條件下過(guò)濾，培養(yǎng)后評(píng)價(jià)。,21,驗(yàn)證準(zhǔn)備：,- 測(cè)試菌液準(zhǔn)備 增菌過(guò)夜，并調(diào)整至106～108 CFU/ml - 消毒劑稀釋至規(guī)定濃度。 分裝10ml于若干無(wú)菌試管中；試管上標(biāo)注消毒時(shí)間：如“1分鐘組” ，“5分鐘組” ，“10分鐘組”或其他要求

9、的時(shí)間段。- 配制中和劑（分裝100ml，300ml）,22,驗(yàn)證步驟（1）：,- 接種 接種各驗(yàn)證菌種至盛有待驗(yàn)證消毒劑的試管（使接后濃度>104 CFU/ml)，混合均勻，并立即開(kāi)始計(jì)時(shí)。- 中和、過(guò)濾將消毒劑傾入100ml中和劑中，混合，稀釋（如需要），過(guò)濾，然后用100ml中和劑清洗濾膜，濾過(guò)3次。- 陽(yáng)性對(duì)照 用無(wú)菌水代替消毒劑，步驟同上。,23,驗(yàn)證步驟（2）：,培養(yǎng)和計(jì)數(shù) 取下濾膜放入規(guī)定的培

10、養(yǎng)基平板，在規(guī)定的溫度、時(shí)間培養(yǎng)后，記數(shù)。和陽(yáng)性對(duì)照相比，微生物數(shù)量下降應(yīng)至少3個(gè)對(duì)數(shù)值（細(xì)菌芽孢至少2個(gè)對(duì)數(shù)值）。,24,驗(yàn)證步驟（3）：表面挑戰(zhàn)試驗(yàn),,根據(jù)設(shè)施的實(shí)際情況，選擇不同材質(zhì)的載體。玻璃，不銹鋼，塑料薄膜，乳膠，墻面涂料，地面材質(zhì)接種，并確認(rèn)實(shí)際數(shù)量接觸殺菌、中和、過(guò)濾……,25,正確使用消毒劑（1）,稀釋消毒劑時(shí)應(yīng)用純化水、注射用水設(shè)備使用后作徹底清潔將環(huán)境常見(jiàn)菌列入驗(yàn)證范疇輪換使用不同的消毒劑，消毒劑間要