臨床微生物標(biāo)本采集規(guī)范

1、臨床微生物標(biāo)本采集規(guī)范,天?？h人民醫(yī)院蔡福元2017-04-13,主要內(nèi)容,標(biāo)本規(guī)范化采集的重要性國(guó)內(nèi)微生物標(biāo)本的采集目前存在的問(wèn)題 微生物標(biāo)本采集基本原則臨床微生物標(biāo)本的采集,標(biāo)本規(guī)范化采集的重要性,正確采集、處理與運(yùn)送細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本直接關(guān)系到致病菌培養(yǎng)的正確性與陽(yáng)性率的高低，是臨床細(xì)菌檢驗(yàn)成功的關(guān)鍵。標(biāo)本質(zhì)量的好壞直接影響診斷結(jié)果的正誤，不當(dāng)?shù)臉?biāo)本可導(dǎo)致假陰性、假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)，因此標(biāo)本采集與處理的規(guī)范化是準(zhǔn)確、及時(shí)

2、地向臨床提供重要的臨床感染信息的基礎(chǔ)。好的微生物檢驗(yàn)標(biāo)本可提升實(shí)驗(yàn)室工作效率及病患照顧質(zhì)量，降低醫(yī)療成本。,國(guó)內(nèi)微生物標(biāo)本的采集目前存在的問(wèn)題 標(biāo)本送檢率低 從全國(guó)來(lái)看，抗感染治療前，送檢相關(guān)標(biāo)本可能只占應(yīng)送標(biāo)本的一半左右，與抗菌藥物應(yīng)用率之高形成鮮明的反差。一些醫(yī)師在經(jīng)驗(yàn)性治療受挫后方送標(biāo)本，此時(shí)已失去陽(yáng)性培養(yǎng)的機(jī)會(huì)。 標(biāo)本有缺陷 正確收集各種臨床標(biāo)本，關(guān)注特檢標(biāo)本采樣與送檢的方法和條件，是完成病原學(xué)診

3、斷的先決條件。,如何提高細(xì)菌陽(yáng)性檢出率,標(biāo)本采集時(shí)機(jī)標(biāo)本采集方法標(biāo)本的質(zhì)與量標(biāo)本的運(yùn)送與保存鏡檢篩選合格標(biāo)本高質(zhì)量、多種分離培養(yǎng)基培養(yǎng)環(huán)境臨床醫(yī)生對(duì)報(bào)告單的解讀及抗生素合理使用,,,微生物標(biāo)本采集基本原則1.及時(shí)采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查2.在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本3.采樣時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作4.采樣后立即送檢甚至床旁接種尤其是厭氧培養(yǎng)5.混有正常菌群污染標(biāo)本，不可置肉湯培養(yǎng)6.標(biāo)本容器須滅菌處理，但不得使用消毒

4、劑7.送檢標(biāo)本應(yīng)注明來(lái)源和檢驗(yàn)?zāi)康?臨床微生物標(biāo)本采集（一）血培養(yǎng)檢測(cè)采血指征 臨床上疑為敗血癥、膿毒血癥或其他血液感染的患者 1. 發(fā)熱（≥38℃）或低溫（≤36℃） 2. 寒戰(zhàn) 3. 白細(xì)胞增多（>10×109/L，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核白細(xì)胞增多） 4. 粒細(xì)胞減少（成熟的多核白細(xì)胞<1×109/L）,5 . 血小板減少6．皮膚粘膜出血7．昏迷，

5、休克8．多器官衰竭9. CRP升高在評(píng)估可疑新生兒敗血癥時(shí)，除發(fā)熱或低燒外，很少培養(yǎng)出細(xì)菌，應(yīng)該補(bǔ)充尿液和腦脊液培養(yǎng)。 對(duì)入院危重感染患者未進(jìn)行系統(tǒng)性抗菌藥物治療之前，應(yīng)及時(shí)采集血培養(yǎng)。,要求：嚴(yán)格無(wú)菌操作，不允許在皮膚消毒后用手按壓靜脈，除非帶有無(wú)菌手套。不推薦采血和接種血培養(yǎng)瓶更換注射器針頭， 采用真空采血裝置能降低污染率。說(shuō)明： 無(wú)論采用何種采血方法，血培養(yǎng)可接受的污染率通常是≤3%。研究表明，經(jīng)過(guò)專門(mén)

6、培訓(xùn)的熟練抽血者采集血培養(yǎng)的污染率為3%，而未經(jīng)培訓(xùn)的住院醫(yī)生和護(hù)士污染率則達(dá)11%。因此對(duì)臨床護(hù)士就血培養(yǎng)標(biāo)本采集進(jìn)行專門(mén)的、嚴(yán)格的培訓(xùn)是非常必要的。,（二）血培養(yǎng)標(biāo)本采集和運(yùn)送 1.采集時(shí)間 要求：對(duì)懷疑菌血癥、真菌血癥的患者，在考慮使用抗菌藥物之前，應(yīng)立即采集血培養(yǎng)標(biāo)本。必須同時(shí)或間隔短時(shí)間內(nèi)采集2套（每套包括1只普通血培養(yǎng)瓶及1只厭氧血培養(yǎng)瓶）以上血培養(yǎng)標(biāo)本。,,說(shuō)明：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明細(xì)菌入血后約1小時(shí)，寒戰(zhàn)和發(fā)燒開(kāi)始出現(xiàn)2

7、小時(shí)內(nèi)，此時(shí)為采集血培養(yǎng)標(biāo)本進(jìn)行病原菌培養(yǎng)的最佳時(shí)機(jī)。在不同的時(shí)間點(diǎn)采血只有在以下情況才有必要：疑似感染性心內(nèi)膜炎或其他血管內(nèi)（如導(dǎo)管相關(guān)性感染）感染患者的連續(xù)性菌血癥。,,為了提高病人血培養(yǎng)的陽(yáng)性率，最好的抽血時(shí)間是：,A.發(fā)熱開(kāi)始時(shí) 　　B.寒戰(zhàn)開(kāi)始時(shí) 　　C.發(fā)熱最高峰時(shí) 　　D.寒戰(zhàn)結(jié)束時(shí) 　　E.預(yù)計(jì)寒戰(zhàn)發(fā)熱前,2.采集部位 要求：從兩側(cè)上肢靜脈采血，“雙瓶雙側(cè)”采血培養(yǎng)。至

8、少做到“雙側(cè)雙瓶”。必要時(shí)從下肢靜脈采血做第三套血培養(yǎng)。 說(shuō)明：不建議采集（1）動(dòng)脈血，因其診斷價(jià)值沒(méi)有比靜脈血更大；（2）靜脈留置導(dǎo)管，因其常伴有高污染率。如果必須從留置導(dǎo)管內(nèi)采血，也應(yīng)同時(shí)從外周靜脈采集另外一個(gè)血培養(yǎng)標(biāo)本，以幫助陽(yáng)性結(jié)果的判讀。,所謂“雙瓶雙側(cè)”，是指從一個(gè)部位采血接種一套培養(yǎng)瓶，再?gòu)牧硪徊课徊裳臃N另一套培養(yǎng)瓶。（通常是雙臂） 所謂“雙側(cè)雙瓶”，是指從一個(gè)部位采血接種一個(gè)需氧瓶，再?gòu)牧硪徊课徊裳?/p>

9、種另一個(gè)厭氧瓶。 一次靜脈采血注入到多個(gè)培養(yǎng)瓶中應(yīng)視為單個(gè)血培養(yǎng)。,3.采集次數(shù)要求：對(duì)懷疑菌血癥、真菌血癥的成人患者，推薦同時(shí)采集2~3套（不同部位）血培養(yǎng)標(biāo)本（即雙瓶雙臂同時(shí)采集血培養(yǎng)標(biāo)本）。 嬰幼兒患者，推薦同時(shí)采集2次（不同部位）血培養(yǎng)標(biāo)本。說(shuō)明：除特殊情況之外，在采取血培養(yǎng)后的2至5天內(nèi)，無(wú)需重復(fù)采取血培養(yǎng)。因?yàn)榭咕委煹?至5天內(nèi)，血液中的細(xì)菌不會(huì)立即消失。研究證明，血培養(yǎng)只做1套的檢出率為65%，做2套和

10、3套的檢出率分別為80%和96%。單瓶的血培養(yǎng)檢出率不高，而且結(jié)果很難做出臨床解釋。,4.采血量要求： 成年患者推薦的采血量為每套不少于10ml， 每瓶不少于5ml。 嬰幼兒患者推薦的采血量為每瓶不少于2ml。,說(shuō)明： 血標(biāo)本采集的量是影響檢出率的最重要的因素。成人血培養(yǎng)采血量在2~30ml之間，病原菌檢出率與采血量成正比例增長(zhǎng)。每增加1ml的血液，病原菌的檢出率增加3.2%。兒童患者因?yàn)檠褐胁≡鷿?/p>

11、度較高，血培養(yǎng)量無(wú)需等同于成人。對(duì)血液病患者或者血容量相對(duì)較低的患者建議使用兒童瓶來(lái)減少血液的采集量增加病原菌的檢出率。,5.血液標(biāo)本在需氧瓶和厭氧瓶中的分配要求：一個(gè)需氧瓶和一個(gè)厭氧瓶為一套血培養(yǎng)，作為常規(guī)血培養(yǎng)的組合。說(shuō)明：采用一對(duì)需氧瓶+厭氧瓶組合，比采用二個(gè)需氧瓶的組合可檢出能更多的葡萄球菌、腸桿菌科細(xì)菌和厭氧菌。而且，采兩瓶可以保證足夠的采血量。當(dāng)被用來(lái)做培養(yǎng)的采血量少于推薦值時(shí)，血必須首先接種需氧瓶，然后將剩余的血液接種

12、入?yún)捬跗?。因?yàn)槎鄶?shù)菌血癥是由需氧和兼性需氧細(xì)菌造成的，而這些細(xì)菌從需氧瓶中更好的被分離。,由于嬰幼兒患者厭氧菌所致菌血癥比較罕見(jiàn)，嬰幼兒血培養(yǎng)可以僅用需氧瓶，為提高檢出率、區(qū)分污染菌，應(yīng)采用兩只需氧瓶為一組血培養(yǎng)。仍然采用雙側(cè)雙瓶的采血方式。,6.血培養(yǎng)標(biāo)本的運(yùn)送要求：（1）采集后的血培養(yǎng)瓶應(yīng)在1小時(shí)之內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。（2）血培養(yǎng)瓶在接種前和接種后均不得冷藏和冷凍。說(shuō)明：血培養(yǎng)瓶冷藏或冷凍會(huì)將一些微生物殺滅，將裝著液體的容器冰凍也會(huì)

13、使容器破裂。,二 、下呼吸道（痰培養(yǎng)）標(biāo)本采集規(guī)范標(biāo)本采集方法醫(yī)師或護(hù)士直視下采集標(biāo)本病人先漱口，去除表面的菌群教育病人深咳，收集從下呼吸道咳出的痰液,臨床上約半數(shù)咳痰標(biāo)本不合格！咳痰途徑口咽部不可避免地受到污染。唾液中口咽部定植菌的濃度可達(dá)108 ～109/ml。研究顯示，國(guó)內(nèi)常規(guī)痰標(biāo)本中約半數(shù)存在唾液嚴(yán)重污染現(xiàn)象。,合格標(biāo)本的判斷標(biāo)準(zhǔn)： 外觀：觀察顏色、粘度、有無(wú)血絲或膿。若標(biāo)本為水狀且很明顯是唾液，則應(yīng)拒收。為

14、了判定是否來(lái)自下呼吸道的痰，需檢查是否為合格的痰標(biāo)本。白細(xì)胞＞25個(gè)/低倍鏡視野、鱗狀上皮細(xì)胞＜10個(gè)/低倍鏡視野為合格標(biāo)本。采集合格標(biāo)本對(duì)細(xì)菌的診斷極為重要。,,合格痰液標(biāo)本,不合格痰液標(biāo)本,（一）采集指征凡是發(fā)熱、咳嗽和咳痰，痰呈膿性、粘稠或血性，并伴有胸痛、氣急，肺部聞及濕羅音，外周白細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞比例明顯增高，X線檢查提示肺部有炎性浸潤(rùn)或胸腔積液，甚至出現(xiàn)感染性休克和呼吸衰竭等患者，應(yīng)采集痰液或下呼吸道標(biāo)本。,對(duì)可疑烈性

15、呼吸道傳染?。ㄈ鏢ARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集檢驗(yàn)標(biāo)本時(shí)必須注意生物安全防護(hù)。對(duì)于細(xì)菌性肺炎，痰標(biāo)本送檢每天1次，連續(xù)2-3天；不建議24h內(nèi)多次采集，除非痰液外觀性狀改變；懷疑分枝桿菌感染者，應(yīng)連續(xù)收集3天清晨痰液送檢,（二）采集方法1、自然咳痰法 以晨痰為佳。用清水反復(fù)漱口，用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐入無(wú)菌容器中，盡快送檢。否則有的細(xì)菌（如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌）在外界可能死亡。不能及時(shí)送檢的標(biāo)本，室溫保存≤

16、2h。要求采到肺深部的痰液，不要唾液。,在抗生素應(yīng)用前采集痰標(biāo)本;標(biāo)本采集后1-2h內(nèi)必須立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室處理；咳痰標(biāo)本應(yīng)用最早且廣泛，但也是最受爭(zhēng)議的標(biāo)本 ;取標(biāo)本前應(yīng)摘去牙托，清潔口腔如刷牙和漱口;深咳，采集標(biāo)本過(guò)程中要有專業(yè)的醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo);,2.小兒取痰法　用彎壓舌板向后壓舌，用棉拭子深入咽部，小兒經(jīng)壓舌刺激咳嗽時(shí)，可噴出肺部和氣管分泌物，粘在棉拭子上送檢。幼兒還可用手指輕叩胸骨柄上方，以誘發(fā)咳痰。3.支氣管鏡采集法

17、 –-經(jīng)支氣管鏡直接吸引 –-支氣管肺泡灌洗 –-防污染樣本毛刷,（三）注意事項(xiàng)1. 痰標(biāo)本不能及時(shí)送檢者，可暫存4℃冰箱。室溫下耽擱數(shù)小時(shí)，定植于口咽部的非致病菌過(guò)度生長(zhǎng)而肺炎鏈球菌、葡萄球菌和流感嗜血桿菌檢出率則明顯降低。,2. 在臨床上咳痰仍是診斷肺部感染最常用的標(biāo)本，但咳痰也最易被口咽部正常菌群污染。痰液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，必須區(qū)分是病原菌還是來(lái)自上呼吸道的正常菌群。經(jīng)過(guò)洗滌處理的痰液或自氣管鏡采集及氣管穿刺

18、所獲標(biāo)本，結(jié)果比較可靠。,3.由于口腔和咽部存在大量的革蘭陽(yáng)性和革蘭陰性厭氧細(xì)菌，而且缺乏可靠的方法區(qū)分它們究竟是致病菌還是定植菌，因此不主張對(duì)咳痰標(biāo)本進(jìn)行厭氧菌培養(yǎng)。4. 約有1/4-1/2肺部感染患者可能發(fā)生菌血癥，應(yīng)同時(shí)做血培養(yǎng)。,三 、尿培養(yǎng)標(biāo)本采集規(guī)范（一）尿培養(yǎng)標(biāo)本送檢指征1. 有典型的尿路感染癥狀；2. 有肉眼膿尿或血尿；3. 尿常規(guī)檢查白細(xì)胞或亞硝酸鹽陽(yáng)性；4. 有不明原因的發(fā)熱，無(wú)其他局部癥狀；5. 留置

19、導(dǎo)尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱；6. 膀胱排空功能受損；,7. 泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前；8. 有尿路感染癥狀者，前次培養(yǎng)結(jié)果陰性或抗菌治療48h后仍持續(xù)發(fā)熱。9. 抗生素停藥后，感染癥狀再次出現(xiàn)。,（二）尿培養(yǎng)標(biāo)本采集方法 1．清潔中段尿 留取清晨清潔中段尿標(biāo)本，先用肥皂水仔細(xì)清洗會(huì)陰部，再用清水沖洗尿道口周圍；將前段尿排去，留取中段尿10ml左右于無(wú)菌容器內(nèi)，立即加蓋送檢，2h內(nèi)接種。該方法簡(jiǎn)單、易行，是最常用的尿標(biāo)本收集方法，但是容易

20、受到會(huì)陰部細(xì)菌污染。,2．恥骨上膀胱穿刺 使用無(wú)菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮膚消毒穿入膀胱吸取尿液，是評(píng)估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法，主要用于厭氧菌培養(yǎng)或留取標(biāo)本困難的嬰兒尿標(biāo)本的采集。 3．直接導(dǎo)尿 按常規(guī)方法對(duì)會(huì)陰局部進(jìn)行消毒后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，獲取膀胱尿液，可減少尿液標(biāo)本污染，準(zhǔn)確地反映膀胱感染情況。但有可能下尿道細(xì)菌進(jìn)入膀胱，導(dǎo)致繼發(fā)感染，一般不提倡使用。,4．小兒收集包 無(wú)自控能力的小兒可用收集包收集尿液，

21、這種裝置由于很難避免會(huì)陰部菌群污染產(chǎn)生假陽(yáng)性，所以只有在檢驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)才有意義。如果檢驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，應(yīng)結(jié)合臨床進(jìn)行分析，必要時(shí)可使用膀胱上穿刺或?qū)蚍羧?biāo)本進(jìn)行復(fù)檢。,5．留置導(dǎo)尿管收集尿液 用導(dǎo)尿管導(dǎo)取10-15ml尿液置滅菌容器內(nèi)送檢。長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管者，應(yīng)在更換新導(dǎo)尿管后留取尿標(biāo)本。留置導(dǎo)尿患者應(yīng)消毒導(dǎo)尿管外部及尿管口，采取無(wú)菌操作方法，用注射器通過(guò)導(dǎo)尿管吸取尿液。注意防止混入消毒劑，不能從尿液收集袋中采集尿液。,（三）采集時(shí)

22、間和標(biāo)本運(yùn)送 1.應(yīng)選擇在抗菌藥物應(yīng)用前或停用抗菌藥物5天后采集尿液。2.通常采集清晨第1次尿液送檢，確保尿液在膀胱內(nèi)停留4h以上，使細(xì)菌有足夠時(shí)間繁殖。囑患者睡前少飲水以免尿液稀釋。3.懷疑沙門(mén)菌感染時(shí)應(yīng)在發(fā)病2周左右采集尿液培養(yǎng)。,4.對(duì)無(wú)癥狀的患者應(yīng)連續(xù)采集3天晨尿送檢。5.懷疑結(jié)核分枝桿菌感染時(shí)，患者應(yīng)停藥1-2天后采集晨尿或24h尿的沉渣部分10-15ml送檢。6. 標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢、及時(shí)接種，室溫下保存時(shí)間不得

23、超過(guò)2h（夏季保存時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存），冷藏保存標(biāo)本必須在6h內(nèi)進(jìn)行接種，但冷藏保存的標(biāo)本不能用于淋病奈瑟菌培養(yǎng)。,（四）注意事項(xiàng)1. 由于自然排尿收集的標(biāo)本很難避免會(huì)陰部及下尿道細(xì)菌污染，所以需要定量接種、合理評(píng)價(jià)才能判斷培養(yǎng)的細(xì)菌是否與尿路感染有關(guān)。尿標(biāo)本菌落計(jì)數(shù)中革蘭陰性桿菌數(shù)>105CFU/ml 或革蘭陽(yáng)性球菌數(shù)>104CFU/ml時(shí)有臨床診斷意義。 （不是絕對(duì)的，受多因素影響，綜合判斷）,2. 尿液標(biāo)本的采

24、集和培養(yǎng)中的問(wèn)題是污染雜菌，故應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行無(wú)菌操作。3. 尿標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，以免污染，尿液中不得加防腐劑和消毒劑。4.除非是流行病學(xué)調(diào)查，長(zhǎng)期留置導(dǎo)尿管患者常規(guī)尿培養(yǎng)沒(méi)有臨床意義，大量病原菌?？稍谶@類患者中檢出，導(dǎo)尿管留置時(shí)間延長(zhǎng)易導(dǎo)致與引起患者尿道感染不一致的微生物定植生長(zhǎng)；,5.不可從集尿袋的下端管口留取標(biāo)本，集尿袋內(nèi)的尿液也不能用于培養(yǎng)，可能會(huì)引起污染；6.臨床常讓患者留取清潔中段尿，應(yīng)該在醫(yī)護(hù)人員監(jiān)督指導(dǎo)下讓患者正確的

25、留取清潔中段尿；7.由于種種原因，患者常常不能正確地留取清潔中段尿，實(shí)驗(yàn)室只是針對(duì)尿液標(biāo)本培養(yǎng)的結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，或常常由于分析前尿液標(biāo)本污染了多種細(xì)菌無(wú)法正確解釋的結(jié)果，可能延誤了臨床的正確診斷和治療。,四、 大便培養(yǎng)標(biāo)本采集規(guī)范 （一）采集時(shí)間腹瀉患者應(yīng)在急性期，并盡可能在使用抗生素之前采集新鮮糞便；傷寒患者在發(fā)病2周以后。（二）采集方法1．自然排便采集法 自然排便后，挑取有膿血或黏液部位的糞便2-3g ，液狀糞便取絮狀物

26、盛于無(wú)菌的容器內(nèi)或置于保存液或增菌液中送檢。,2．直腸拭子采集法 對(duì)不易獲得糞便或排 便困難的患者及嬰幼兒，可采用直腸拭子 法采集標(biāo)本，其方法是將拭子前端用甘油 濕潤(rùn)。然后插入肛門(mén)約4～5cm（幼兒約 2～3cm）處，輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)，擦取直 腸表面粘液后取出，盛入無(wú)菌試管或保存 液中送檢。,（四）注意事項(xiàng),在腹瀉發(fā)病的正確時(shí)間收集標(biāo)本，病人應(yīng)盡量在急性期（3d）內(nèi)和用藥前采集標(biāo)本，以提高檢出率。大便標(biāo)本中含

27、有很多雜菌，糞便標(biāo)本的采集須注意防止外界臟物污染，盡量采用無(wú)菌容器。為提高陽(yáng)性檢出率，要采集新鮮標(biāo)本，立即送檢。,五、 泌尿生殖道標(biāo)本采集規(guī)范 （一）標(biāo)本采集 1、尿道分泌物 （1）女性尿道：患者排尿1小時(shí)后采集，首先拭去尿道口的滲出物；再用拭子通過(guò)陰道，靠著恥骨聯(lián)合，按摩尿道，采集分泌物；如未獲得分泌物，清洗外尿道，用滅菌紗布或棉球擦拭，用泌尿生殖道拭子插入尿道2－4cm，旋轉(zhuǎn)拭子2秒。,（2） 男性尿道：用泌尿生殖

28、道拭子插入尿道腔2－4cm，旋轉(zhuǎn)拭子，至少停留20秒，而使之容易吸收。2、生殖道分泌物 （1）陰道分泌物:擦除過(guò)多的分泌物和排出液，用無(wú)菌棉拭子采取陰道口內(nèi)4厘米內(nèi)側(cè)壁或后穹窿處分泌物，如果需要涂片，需再用一個(gè)拭子。,（2）男性前列腺：用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口，沖洗尿道膀胱，從肛門(mén)用手指按摩前列腺，使前列腺液溢出，用無(wú)菌容器收集。無(wú)肉眼可見(jiàn)膿液時(shí)，可用滅菌拭子輕輕伸入前尿道內(nèi)，旋轉(zhuǎn)拭子采集標(biāo)本。,（二）注意

29、事項(xiàng) 1.生殖器是開(kāi)放性器官，標(biāo)本采集過(guò)程中 應(yīng)嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)程以減少雜菌污 染。 2.由于陰道正常菌群的存在而使細(xì)菌的分 離鑒定受到干擾，所以在采集女性生殖 道標(biāo)本時(shí)應(yīng)注意盡量減少或避免正常菌 群的污染。,3.疑有宮腔感染，如遇產(chǎn)婦需行剖宮產(chǎn)，待胎兒娩出后取宮腔分泌物，并同時(shí)取嬰兒耳拭子一同送檢。4.沙眼衣原體和病毒均在宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖，取材

30、時(shí)拭子應(yīng)在病變部位（移行上皮處稍內(nèi)）停留十幾秒鐘，并采集盡可能多的上皮細(xì)胞。,5. 生殖道感染厭氧菌也較多見(jiàn)，疑有厭氧 菌 感染時(shí)，標(biāo)本采集和運(yùn)送應(yīng)避免與氧氣接 觸， 最佳方法是床邊采樣，直接接種至厭 氧裝置內(nèi)。 6. 淋病奈瑟菌檢查時(shí)，取材的深度一定要夠， 因?yàn)榱芮蚓冒l(fā)于柱狀上皮細(xì)胞而不是復(fù) 層鱗狀上皮細(xì)胞。不論男女尿道及子宮頸 均需用拭子插入尿道及子宮頸

31、3cm深轉(zhuǎn)動(dòng) 并停留10-30s取樣送檢。,7. 淋病奈瑟菌抵抗力低，對(duì)外環(huán)境變化頗 為敏感，對(duì)寒冷和干燥抵抗力很弱。因此， 為了保證培養(yǎng)有足夠的成功率，取材后 要盡快送檢，立即接種，標(biāo)本離體時(shí)間越 短越好。,六、 化膿和創(chuàng)傷標(biāo)本采集規(guī)范（一）標(biāo)本采集1．開(kāi)放性感染和已潰破的化膿灶 標(biāo)本采集 前先用滅菌生理鹽水拭去表面滲出物，盡可 能用抽吸或

32、將拭子深入傷口，緊貼傷口前沿 取樣，從膿腫底部或膿腫壁取樣，效果最好。 慢性感染，污染嚴(yán)重，很難分離到致病菌， 可取感染部位下的組織，研磨成組織勻漿接 種于適宜的培養(yǎng)基。,2．封閉性膿腫 局部消毒后用針及注射器抽 吸膿腫壁，將所有物質(zhì)置于無(wú)菌試管內(nèi)送檢， 疑為厭氧菌感染時(shí)立即作床邊接種或置于厭 氧轉(zhuǎn)運(yùn)裝置送檢（針頭插一橡皮塞隔絕空 氣）。但取樣時(shí)，可能會(huì)帶入與感染過(guò)程無(wú)

33、 關(guān)的定植細(xì)菌。3．大面積創(chuàng)傷感染：可取感染組織塊或沾有 膿汁的內(nèi)層敷料送檢。,（二）注意事項(xiàng) 細(xì)菌對(duì)干燥敏感或只能采集少量標(biāo)本時(shí)， 用棉拭子采集標(biāo)本后立即放入液體培養(yǎng)基 內(nèi)，或采標(biāo)本前先將棉拭子沾少許肉湯以 保持標(biāo)本濕度。對(duì)于不能立即送檢的標(biāo)本，應(yīng)放4℃保存， 培養(yǎng)淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌的標(biāo)本除外。盡可能在用藥前采集標(biāo)本。采樣前病灶局部應(yīng)避免用抗菌藥物或消毒劑。,革蘭染色對(duì)標(biāo)本進(jìn)行評(píng)估。涂

34、片中如出現(xiàn) 上皮細(xì)胞提示標(biāo)本已被污染。沒(méi)有上皮細(xì)胞 而有白細(xì)胞說(shuō)明標(biāo)本采集正確。有的創(chuàng)傷均可有細(xì)菌污染，但不一定發(fā)生 感染，因此對(duì)分離到的細(xì)菌要根據(jù)創(chuàng)傷的 情況、菌量和種數(shù)，收集標(biāo)本的處理過(guò)程、 機(jī)體免疫力及抗生素的使用情況等多種因 素來(lái)分析判斷。,七、 穿刺液標(biāo)本采集規(guī)范 （一）腦脊液1. 采集時(shí)間： 懷疑為腦膜炎的病人，應(yīng)立即采集腦脊液，最好在使用抗菌藥物以前采集標(biāo)本。2. 采集方法： 用

35、腰穿方法采集腦脊液3-5ml，分裝到3個(gè)無(wú)菌試管中，每個(gè)試管1-2ml。第一管用于細(xì)菌培養(yǎng)! 也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶,用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。,3.標(biāo)本運(yùn)送和保存： 腦膜炎奈瑟菌離體后會(huì)迅速自溶,肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌也很容易死亡,因此,標(biāo)本應(yīng)立即送檢,并注意保溫、防干燥。切不可置冰箱保存,否則會(huì)影響檢出率。 腦脊液標(biāo)本送檢的理想時(shí)間為15分鐘內(nèi)，半小時(shí)送檢是可接受的，如果送檢時(shí)間超過(guò)1小時(shí)，則會(huì)影響結(jié)果。如不能及時(shí)送檢，可

36、使用血培養(yǎng)瓶（懷疑腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌感染時(shí)，請(qǐng)勿使用血培養(yǎng)瓶）,（二）膽汁及其它穿刺液（胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液及鞘膜液等）1. 采集時(shí)間 ： 懷疑感染存在，應(yīng)盡早采集標(biāo)本，一般在患者使用抗菌藥物之前或停止用藥后2-3天采集。2. 采集方法①無(wú)菌操作穿刺抽取標(biāo)本或外科手術(shù)采集標(biāo)本。②標(biāo)本采集量應(yīng)＞1ml。 胸腔積液、腹水可抽取10ml, 心包液、 關(guān)節(jié)液等可抽取2-5ml 。,③標(biāo)本采集后注入無(wú)菌小瓶或無(wú)菌試管

37、 中送檢也可將抽取液直接注入血培養(yǎng)瓶， 用血培養(yǎng)儀培養(yǎng)。為防止穿刺液的凝固，應(yīng)在無(wú)菌試管中 預(yù)先加入滅菌肝素，再注入穿刺液。,小結(jié),標(biāo)本采集和運(yùn)送的規(guī)范化是微生物檢驗(yàn)分析前質(zhì)量控制的重要內(nèi)容之一。ISO 15189的技術(shù)要素部分將實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)全過(guò)程質(zhì)量保證分為三部分,即分析前質(zhì)量保證;分析中質(zhì)量保證;分析后質(zhì)量保證。有報(bào)道，有93%的實(shí)驗(yàn)室誤差來(lái)自分析前，分析前階段的質(zhì)量控制是整個(gè)檢驗(yàn)質(zhì)量控制中一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)，