重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子2對(duì)大鼠機(jī)械通氣所致肺損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制.pdf

1、第一部分重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子2對(duì)大鼠機(jī)械通氣所致肺損傷的保護(hù)作用
　　目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠機(jī)械通氣肺損傷模型,旨在研究重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2對(duì)機(jī)械通氣所致肺損傷的保護(hù)作用。
　　方法：實(shí)驗(yàn)選用SPF級(jí)雄性SD大鼠40只,隨機(jī)分成四組:Control組為正常對(duì)照組:大鼠僅行氣管插管,不行機(jī)械通氣;LV組為小潮氣量機(jī)械通氣組(參數(shù)設(shè)置:潮氣量=6ml/kg,RR=70次/分,PEEP=3cmH2O,FiO2=21％);

2、VILI組為大潮氣量機(jī)械通氣即機(jī)械通氣肺損傷組(參數(shù)設(shè)置:潮氣量=20ml/kg,RR=70次/分,PEEP=OemH2O,FiO02=21％);rhKGF-2+VILI組為機(jī)械通氣肺損傷+rhKGF-2預(yù)先給藥治療組(rhKGF-2按5mg/Kg經(jīng)氣管內(nèi)滴注給藥,給藥72小時(shí)后再行大潮氣量機(jī)械通氣,參數(shù)同VILI組)。所有動(dòng)物在機(jī)械通氣4小時(shí)后放血處死,收集標(biāo)本,行動(dòng)脈血?dú)夥治?并檢測(cè)肺濕干比(W/D),行支氣管肺泡灌洗,檢測(cè)支氣管肺

3、泡灌洗液(BALF)中蛋白濃度,BALF中有核細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù),觀察光鏡(HE染色)及電鏡下肺組織病理改變并行肺損傷評(píng)分。
　　結(jié)果：機(jī)械通氣4小時(shí)后VILI組PaO2(mmHg)與Control組及LV組相比均明顯降低(p＜0.05),而rhKGF-2+VILI組PaO2較VILI組明顯升高(p＜0.05),LV組PaO2與Control組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。VILI組肺W/D、肺損傷評(píng)分、BALF中有

4、核細(xì)胞總數(shù)及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(×105/m1)及BALF中蛋白濃度(ug/ml)與Control組及LV組相比均明顯升高(p＜0.05),rhKGF-2+VILI組上述指標(biāo)均較VILI組明顯降低(p＜0.05),LV組上述指標(biāo)與Control組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。VILI組光鏡下可見肺泡間隔增厚,有較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),肺泡腔內(nèi)可見大量水腫液并有紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞滲出;電鏡下可見肺上皮細(xì)胞嚴(yán)重破壞、基底膜破損間斷、肺泡-毛細(xì)

5、血管屏障斷裂不連續(xù)。而rhKGF-2+VILI組肺組織損傷程度較VILI組明顯減輕。LV組肺組織病理變化與Control組無(wú)明顯差別。
　　結(jié)論：1.健康大鼠接受20ml/kg潮氣量通氣4h可出現(xiàn)機(jī)械通氣肺損傷。2.機(jī)械通氣前72小時(shí)給予5mg/kg重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2氣道內(nèi)滴注給藥可以有效減輕機(jī)械通氣對(duì)肺組織的損傷程度,起到較好的保護(hù)作用。
　　第二部分重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子2對(duì)大鼠機(jī)械通氣所致肺損傷的保護(hù)機(jī)制研究<

6、br>　　目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究rhKGF-2對(duì)VILI大鼠肺組織MP0活性、BALF中炎癥因子、肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞數(shù)目及表面活性物質(zhì)蛋白的影響,旨在探討rhKGF-2對(duì)大鼠機(jī)械通氣所致肺損傷可能的保護(hù)機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)選用SPF級(jí)雄性SD大鼠40只,隨機(jī)分成四組:Control組為正常對(duì)照組(大鼠僅行氣管插管,不行機(jī)械通氣),rhKGF-2組為單純r(jià)hKGF-2給藥組(rhKGF-2按5mg/kg經(jīng)氣管內(nèi)滴注給藥,給藥72小時(shí)后

7、行氣管插管,不行機(jī)械通氣),VILI組為機(jī)械通氣肺損傷組(參數(shù)設(shè)置:FiO2=21％,VT=20ml/kg,PEEP=OcmH2O,RR=70次/分),rhKGF-2+VILI組為機(jī)械通氣肺損傷+rhKGF-2預(yù)先給藥治療組(rhKGF-2按5mg/Kg經(jīng)氣管內(nèi)滴注給藥,給藥72小時(shí)后再行大潮氣量機(jī)械通氣,參數(shù)同VILI組)。所有動(dòng)物在機(jī)械通氣4小時(shí)后經(jīng)頸動(dòng)脈放血處死,檢測(cè)肺組織髓過(guò)氧化物酶(MPO)活性,ELISA法測(cè)定肺泡灌洗液(B

8、ALF)中TNF-α及MIP-2的含量,Realtime PCR檢測(cè)肺組織SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,Western blot法測(cè)定肺組織中表面活性蛋白C(SP-C)水平,SP-C免疫組化染色檢測(cè)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞增殖情況。
　　結(jié)果：VILI組肺組織MPO活性、BALF中TNF-α及MIP-2的含量均較Control組明顯增高(p＜0.05),而rhKGF-2+VILI組MP0活性、BALF中TNF-α及MIP-2

9、的含量均較VILI組明顯降低(p＜0.05),rhKGF-2組上述指標(biāo)與Control組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);VILI組肺組織SP-A、SP-B、SP-C mRNA水平,表面活性蛋白C(SP-C)水平及肺泡上皮細(xì)胞SP-C標(biāo)記指數(shù)均較Control組明顯降低(p＜0.05),而.rhKGF-2+VILI組肺組織SP-A、SP.B、SP-C mRNA水平,SP-C蛋白水平及肺泡上皮細(xì)胞SPC標(biāo)記指數(shù)均較VILI組明顯升高(