云南箭竹遺傳多樣性的研究.pdf

1、云南箭竹（Fargesiayunnanensis Hsueh et Yi）隸屬禾本科竹亞科箭竹屬，是箭竹屬中稈型較大的一種，也是分布海拔較低的一種，主要分布于云南昆明、麗江、永仁、賓川、昌寧等地，生于海拔1700～2400m山區(qū)云南松林或闊葉林下，在分布區(qū)內(nèi)亦普遍栽培，為本屬中分布海拔最低、栽培最廣者。在其自然分布中，云南箭竹有兩個(gè)區(qū)別較大的品系：滇中至滇西分布的品系其分枝相對(duì)較低，稈籜新鮮時(shí)呈灰褐色，被面被塊狀密集貼生的棕色小刺毛，籜

2、鞘通常長于節(jié)間，宿存，新鮮時(shí)淡黃色；而滇西北分布的品系其分枝相對(duì)較高，稈籜新鮮時(shí)呈紫褐色，被面光滑無毛或偶有疏生棕色小刺毛，具有寬窄不等的明顯的紫色條紋。云南箭竹系云南特產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)筍用竹，其秋后產(chǎn)筍和抗寒性強(qiáng)的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)更使其開發(fā)價(jià)值倍增。一般竹類均為春季或夏季發(fā)筍，云南箭竹秋季產(chǎn)筍的特性正好補(bǔ)充了淡季市場(chǎng)。且云南箭竹還是優(yōu)質(zhì)稈用竹種。因此，云南箭竹被認(rèn)為是滇中及以北高海拔地區(qū)最有推廣價(jià)值和發(fā)展前景的優(yōu)良竹種。
　　 本研究利用RA

3、PD技術(shù)對(duì)采集到的70份云南箭竹樣品進(jìn)行了遺傳多樣性的分析，研究現(xiàn)有資源的基因豐富程度及基因多樣性的分布規(guī)律，為今后云南箭竹的保護(hù)提供理論依據(jù)。通過研究，取得了以下進(jìn)展：
　　 1.利用改良的SDS方法從云南箭竹葉片中提取高質(zhì)量的DNA。
　　 2.從昆明、大理、麗江、昌寧等云南箭竹分布地區(qū)采集到70份樣品，其中紫色條紋型云南箭竹35份，褐色斑點(diǎn)型云南箭竹35份，為云南箭竹兩種變異類型種質(zhì)資源的研究和保存打下基礎(chǔ)。

4、>　　 3.優(yōu)化了云南箭竹RAPD-PCR的循環(huán)條件，得出了適合云南箭竹RAPD分析的PCR循環(huán)程序，從而建立了云南箭竹RAPD反應(yīng)最佳體系及程序。通過正交法對(duì)RAPD反應(yīng)條件優(yōu)化，6個(gè)試驗(yàn)因子的最適條件為：模板DNA1-5 ng/μl，隨機(jī)引物0.8～1.0μmol/L，dNTPs濃度0.1～0.15mmol/L，Mg2+濃度2.0～2.5mmol/L，Taq酶用量0.5U～1U，10×PCR Buffer2μl，PCR反應(yīng)總體積為

5、20μl。最佳熱循環(huán)參數(shù)為：94℃預(yù)變性2min，之后進(jìn)行40個(gè)循環(huán)（94℃變性30sec，36℃退火60sec，72℃延伸90sec），最后72℃總延伸7min后在4℃終止反應(yīng)。
　　 4.用110個(gè)隨機(jī)引物對(duì)1份樣品進(jìn)行引物初篩，再從初篩出的30個(gè)隨機(jī)引物對(duì)3份具區(qū)域和變異代表性的樣品進(jìn)行復(fù)篩，成功篩出了21個(gè)適合于云南箭竹RAPD分析的隨機(jī)引物，這些引物可以擴(kuò)增出豐富并且清晰的條帶。
　　 5.利用NTSYS-PC

6、軟件計(jì)算了70個(gè)樣品之間的遺傳相似系數(shù)和遺傳距離，并用UPGMA法對(duì)云南箭竹的RAPD擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行了聚類分析，結(jié)果明顯聚為2類：Ⅰ類群為紫色條紋型，Ⅱ類群為褐色斑點(diǎn)型，這與云南箭竹的宏觀外形特征的區(qū)分相吻合，證明云南箭竹表型上的差異與遺傳因素緊密相關(guān)。且可初步認(rèn)為，云南箭竹的這兩個(gè)形態(tài)上穩(wěn)定的變異類型應(yīng)該作為種下的分類單位看待。因聚類結(jié)果呈現(xiàn)出較明顯的地域性，特別是昆明地區(qū)的云南箭竹聚類，說明地理上較近的同種個(gè)體之間遺傳距離相距較近，親

7、緣關(guān)系較近。
　　 6.從聚類分析的結(jié)果來看，70個(gè)云南箭竹樣品之間的遺傳相似性系數(shù)在0.98～0.55之間，表明了云南箭竹在遺傳進(jìn)化的過程中，隨著時(shí)空的變化，地理位置的變遷，氣候的改變，其基因組DNA發(fā)生了變異，從而構(gòu)成了豐富的云南箭竹資源基因庫。從DNA分子水平上來說，遺傳距離的變幅越大，說明其遺傳分化大、遺傳多樣性高，證明遺傳背景的復(fù)雜性。研究結(jié)果表明：云南箭竹的遺傳相似系數(shù)一般在0.7以上，表明云南箭竹在遺傳上具有較高的