雙鏈RNA介導的哈茨木霉mapk和rac基因沉默.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、許多絲狀真菌營養(yǎng)器官、生殖器官以及侵染機構的產(chǎn)生都需要受環(huán)境條件產(chǎn)生的物理或化學信號的誘導，所以細胞外的信號轉導途徑對絲狀真菌的生長、發(fā)育和成功侵染至關重要。哈茨木霉作為一種重要的植物病原生物防治菌，其防治機理一直是今年研究的熱點。MAPK作為絲裂原活化蛋白激酶級聯(lián)反應途徑的信號轉導因子，通過磷酸化底物蛋白，在絲狀真菌中參與真菌的生長、發(fā)育、脅迫反應及致病性。RAC作為小 G蛋白 Rho家族成員，通過有活性的GTP結合形式與無活性的GD

2、P結合形式之間的轉換，調控著細胞骨架的重排和過氧化物的產(chǎn)生。對這兩個基因在木霉菌生物防治過程中功能研究有助于闡明木霉菌生物防治分子機理，為進一步提高哈茨木霉生物防治效果奠定基礎。
　　本實驗利用RNA干涉技術，導入可形成鏈內 dsRNA的沉默載體，用農(nóng)桿菌介導轉入哈茨木霉，獲得分別對特異基因 mapk和rac表達抑制的沉默轉化子。通過比較轉化子的酶活表達、滲透條件下的生長、及與病原菌平皿對峙實驗分析mapk基因與rac基因對纖維素

3、酶、β-1,3-葡聚糖酶、滲透應急及菌絲的調節(jié)。
　　本實驗成功獲得了哈茨木霉 T88 mapk和rac基因全長編碼區(qū) cDNA序列，提交至 Genbank上，登陸號分別為：FJ716099和FJ595933，mapk編碼406個氨基酸，理論分子量為46.28 kDa。rac編碼204個氨基酸，理論分子量為22.4 kDa。構建了分別沉默 mapk和rac基因的質粒 pCambla1301-mapk和pCambla1301-rac

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