馬傳貧病毒弱毒株前病毒gp90基因在馬體內(nèi)的變異分析.pdf

1、為了研究gp90基因在我國(guó)馬傳貧驢白細(xì)胞弱毒疫苗株致弱過(guò)程中的變異規(guī)律，本實(shí)驗(yàn)以EIAV強(qiáng)毒遼寧株（EIAV—L）感染一匹健康馬，此馬發(fā)病死后，采集脾臟組織以nested—PCR擴(kuò)增前病毒gp90基因片段；以驢強(qiáng)毒株（EIAV—D）感染一匹健康馬，同時(shí)以馬傳染性貧血驢白細(xì)胞弱毒疫苗株（EIAV—DLA）分別接種兩匹健康馬，從不同時(shí)期（15、45、75、105、135d）馬外周血單核細(xì)胞中以nested—PCR擴(kuò)增前病毒gp90基因片段。

2、 將所得的100個(gè)EIAV—DLAgp90的克隆株與EIAV—L的gp90核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行分析比較發(fā)現(xiàn)，核苷酸同源性最低為96.1％，最高為97.4％，編碼的氨基酸同源性最低為91.6％，最高為95.8％。每個(gè)時(shí)期核苷酸序列平均差異率分別是3.295％、3.145％、3.3％、3.185％、3.645％，總平均差異率為3.314％。每個(gè)時(shí)期氨基酸序列平均差異率分別是5.52％、5.51％、5.565％、5.56％

3、、6.365％，總平均差異率為5.704％。變異有明顯的規(guī)律，變異主要包括點(diǎn)突變和缺失，從單個(gè)馬、單個(gè)時(shí)期來(lái)分析，突變的氨基酸位點(diǎn)非常保守，且變異的趨勢(shì)高度一致。但是縱向比較兩匹免疫馬五個(gè)時(shí)期gp90基因編碼的氨基酸序列，每個(gè)時(shí)期的突變的氨基酸位點(diǎn)又與其他時(shí)期不完全相同。EIAV—L的gp90基因編碼的氨基酸有20個(gè)N—連接糖基化位點(diǎn)，EIAV—DLA的gp90基因編碼的氨基酸序列上，N—連接糖基化位點(diǎn)數(shù)目平均是17.2個(gè)，其中有11個(gè)

4、N—連接糖基化位點(diǎn)是高度保守的，在主要中和位點(diǎn)（PND）上，有3處不穩(wěn)定的突變。 EIAV—DLA株與EIAV—D株的gp90序列的比較結(jié)果顯示：來(lái)源于同一免疫馬體內(nèi)的不同克隆株之間的gp90基因存在有密切的遺傳關(guān)系，不同馬體內(nèi)來(lái)源的gp90基因克隆株之間存在一定的差異，這種差異可能與EIAV—DLA所處的不同的宿主環(huán)境有關(guān)。EIAV—DLA株的gp90基因在馬體內(nèi)種群較EIAV—D株的種群均一。EIAV—D株gp90基因在馬