綿羊TTF-1基因的克隆、序列分析及表達(dá)部位檢測(cè).pdf

1、世界綿羊品種庫(kù)中現(xiàn)有的近700個(gè)品種中，除少數(shù)具有產(chǎn)羔率高、性成熟早和常年發(fā)情的特點(diǎn)外，絕大多數(shù)是年產(chǎn)一胎，每胎單羔的綿羊品種，世界主要綿羊生產(chǎn)國(guó)都十分重視綿羊多羔性的研究。甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子1（Thyroid transcription factor1，TTF-1）是一種同源結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子，屬于NKX2家族成員，它在甲狀腺、肺、腦和肝臟中表達(dá)，并調(diào)控組織特異性基因的表達(dá)：它對(duì)哺乳動(dòng)物的繁殖性能有潛在的影響。采用分子生物學(xué)方法研究控制綿羊多

2、羔性狀，是提高綿羊繁殖率的有效途徑之一。 本試驗(yàn)首先從綿羊血液中提取基因組DNA，設(shè)計(jì)三對(duì)特異性引物SP1/SP2、SP3/SP4和SP5/SP6，采用PCR擴(kuò)增TTF-1基因目的序列，通過(guò)感受態(tài)DH5α的轉(zhuǎn)染、質(zhì)粒DNA的提取、限制性酶切以及測(cè)序分析后，GenBank提交序列得到登錄號(hào)：FJ177515，長(zhǎng)度為2972bp，包括全部編碼區(qū)，內(nèi)含子及5’、3’端部分序列。序列同源性分析表明，綿羊TTF-1基因的核酸和蛋白質(zhì)序列在

3、不同哺乳動(dòng)物之間有很高的同源性，分子在進(jìn)化上均相當(dāng)保守；設(shè)計(jì)特異性引物SP7/SP8，通過(guò)RT-PCR方法從動(dòng)物組織擴(kuò)增目的片段，經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)證明TTF-1基因不僅在甲狀腺、肺、腦部有表達(dá)，在腎臟，肝臟也有，只是存在表達(dá)量多少的問(wèn)題，但在脾臟，卵巢和子宮未發(fā)現(xiàn)；最后對(duì)TTF-1基因部分序列的多態(tài)性進(jìn)行預(yù)測(cè)，采用引物SP3/SP4擴(kuò)增發(fā)現(xiàn)，在第一外顯子和第二外顯子前166bp處的編碼區(qū)沒(méi)有突變，但在內(nèi)含子的111bp（G-A），525b