谷氨酰胺誘導小鼠熱休克蛋白70表達的研究.pdf

1、谷氨酰胺(Gln)是動物血液中最豐富的游離氨基酸之一，近年來越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，Gln除了在維持機體酸堿平衡、調(diào)節(jié)機體免疫機能以及為組織和細胞的物質(zhì)和能量代謝提供原料等方面都具有重要作用外，還可以誘導細胞熱休克蛋白70(Hsp70)的表達。本試驗通過給小鼠注射Gln和在胚胎培養(yǎng)液中添加Gln，運用RT-PCR和WesternBlot方法檢測小鼠肝臟、子宮、卵巢和早期胚胎中Hsp70表達的變化，研究體內(nèi)外Gln誘導Hsp70表達的作用。<

2、br>　　 試驗方法:
　　 1.選取8w健康雌性昆明小鼠32只隨機分成4組，Ⅰ組為對照組，尾靜脈注射生理鹽水，試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別尾靜脈注射Gln0.15g·kg-1、0.45g·kg-1、0.75g·kg-1，注射后4h處死，取肝臟、子宮和卵巢，采用RT-PCR和WesternBlot法分別檢測Hsp70mRNA和Hsp70蛋白表達量。
　　 2.小鼠胚胎在37℃、5％CO2條件下，在CZB培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)至四細胞

3、，然后轉(zhuǎn)入含有葡萄糖的CZB培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)，轉(zhuǎn)液時進行分組，Ⅰ組為對照組，使用正常葡萄糖-CZB培養(yǎng)液培養(yǎng)，Gln濃度為1mmol·L-1，試驗Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別使用Gln濃度為2mmol·L-1、6mmol·L-1和10mmol·L-1的葡萄糖-CZB培養(yǎng)液培養(yǎng)。注射hCG113h后計算囊胚發(fā)育率，161h后計算囊胚孵出率，并且采用WesternBlot法檢測各組中囊胚Hsp70蛋白表達量。
　　 試驗結(jié)果:
　　 1

4、.小鼠注射Gln后4h，試驗組Hsp70mRNA和Hsp70蛋白表達量均高于對照組，且表達量隨著Gln注射量的增加而增加。Ⅱ組肝臟、子宮和卵巢組織中Hsp70mRNA比對照組分別增加31.82％、40.00％、41.18％，Hsp70蛋白表達量比對照組分別增加9.49％、5.49％、4.84％，兩者與對照組比較差異不顯著(P＞0.05);Ⅲ組肝臟、子宮和卵巢組織中Hsp70mRNA和Hsp70蛋白表達量比對照組分別增加72.73％、95

5、.00％、135.29％和23.56％、21.10％、14.30％，都顯著高于對照組(P＜0.05);Ⅳ組肝臟、子宮和卵巢組織中Hsp70mRNA和Hsp70蛋白表達量比對照組分別增加140.91％、160.00％、247.06％和35.33％、33.94％、33.77％，其中除肝臟Hsp70蛋白表達量顯著高于對照組(P＜0.05)外，其余均極顯著高于對照組(P＜0.01)。
　　 2.小鼠注射hCG161h后，小鼠囊胚孵出率在

6、對照組為61.88％，試驗Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組分別為64.22％、73.21％和76.41％，Ⅱ組與對照組比較差異不顯著(P＞0.05)，Ⅲ組和Ⅳ組都顯著高于對照組(P＜0.05);對于胚胎Hsp70蛋白表達量，Ⅱ組比Ⅰ組增加0.37％，差異不顯著(P＞0.05)，Ⅲ組和Ⅳ組分別比Ⅰ組增加9.13％和16.42％，顯著高于Ⅰ組(P＜0.05)，另外，Ⅳ組比Ⅲ組多6.68％，差異顯著(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 Gln能