不同波長光照對母雞間腦和中腦c-fos基因表達的影響.pdf

1、本實驗分別采用紅（660nm）、綠（560nm）、藍（480nm）三種發(fā)光二極管對60只150日齡白來航蛋雞進行人工照明，每組20只。將母雞右眼遮光7天后接受20Lux的光照刺激1.5h，暗適應(yīng)1.5h.經(jīng)遮光和光照刺激后，用兩種方法檢測FOS蛋白：1）免疫組化方法，灌流固定，取腦制作石蠟切片。通過免疫組化方法檢測由不同波長光照刺激引起c-fos基因在間腦和中腦的表達；2)蛋白印跡法，對母雞進行光照刺激后，直接斷頭，將雞頭在冰上迅速冷卻

2、，然后在低溫環(huán)境下剝離出雞腦。將剝離出來的雞大腦用錫紙包好，迅速放于－80℃ 冰箱中冷凍。將冷凍后的雞腦搗碎，10000轉(zhuǎn)/秒離心，提取上清液，測出提取液中的蛋白含量，然后用蛋白印跡法來驗證提取液中是否含有FOS蛋白，以此來再次驗證FOS蛋白在雞腦中的存在。本試驗還用免疫組化的方法研究了幾種神經(jīng)肽GnRH、GABA、VIP和β-END在不同波長光照刺激下的表達。通過對FOS蛋白和幾種神經(jīng)肽的檢測，闡明由不同波長光照刺激引起的c-fos基

3、因和神經(jīng)肽在母雞間腦和中腦的表達的影響及其內(nèi)在聯(lián)系，由此來探究光照對雞生殖性能,即對母雞產(chǎn)蛋量的影響，為進一步了解光照對雞產(chǎn)蛋的影響機理打下基礎(chǔ)。
　　 結(jié)果顯示，間腦和中腦內(nèi)有大量Fos樣免疫反應(yīng)陽性神經(jīng)元，主要見于左側(cè)，分布于圓核（Rt）、室旁核（PVN）、前背外側(cè)核（DLA）、外側(cè)膝狀核腹側(cè)部（GLv）和韁核（HB）、中央灰質(zhì)層（SGC）、峽核大細胞部（Imc）和小細胞部（Ipc）、峽視核（ION）、半月核（Slu）、中腦

4、外側(cè)核背側(cè)部（MLd）、紅核（RN）和滑車神經(jīng)核（nIV）等核團內(nèi)，其中Rt、PVN、SGC、Imc和Ipc內(nèi)免疫反應(yīng)陽性樣神經(jīng)元最多。并且蛋白印跡法（western blot）檢測的結(jié)果顯示,49kD到90kD間有明顯特異條帶，即FOS蛋白條帶，證明在母雞腦蛋白提取液中有FOS蛋白存在。不同波長光照刺激均能引起母雞間腦和中腦c-fos基因的表達，但影響有差異。綠光組比紅光組表達強，普遍差異顯著，藍光組表達介于兩者之間。但在GLv核中紅