兔神經(jīng)肽S及其受體基因的克隆、組織表達及熱應(yīng)激對其表達的影響.pdf

1、神經(jīng)肽S（neuropeptideS，NPS）是2002年發(fā)現(xiàn)的一種神經(jīng)肽，由20個氨基酸組成，通過激活其受體NPSR而發(fā)揮作用，因其氨基端殘基在所有已測定動物均為絲氨酸（serine，S），故ReinscheidRK等人將其命名為神經(jīng)肽S（NPS）。NPS及其受體主要分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，外周器官也有少量分布。NPS/NPSR系統(tǒng)參與調(diào)節(jié)廣泛的生理功能，包括喚醒、覺醒、焦慮、攝食、巨噬細胞免疫應(yīng)答和氧化損傷等。目前在大鼠和小鼠有關(guān)NPS

2、的研究報道較多，但未見有關(guān)兔NPS及其受體基因克隆和組織表達的報道。因此本文用RT-PCR方法開展了這方面的研究，克隆了兔NPS及其受體基因，研究了其組織分布，并探討了熱應(yīng)激對兔下丘腦-垂體-腎上腺軸NPS及其受體mRNA表達的影響。結(jié)果如下：
　　 1、利用同源克隆方法首次從兔腦組織中克隆得到NPS基因的全長編碼序列（CDS）及NPSR部分CDS序列。兔NPS基因長為270bp，NPSR基因長為847bp，并將它們登錄在Gen

3、ebank上，基因登錄號分別為EU978456和FJ713102。兔NPS前體基因與黑猩猩、九帶犰狳、人和馬NPS前體基因氨基酸同源性較高，分別為76.7％、75.6％、75.6％和75.6％。兔NPS前體基因與大鼠、牛、小鼠、狗、負鼠、雞、豚鼠、鼩鼱，獼猴和加氏大嬰猴氨基酸序列同源性在52.2％-71.1％之間。NPS基本上是保守的，在NPS基因前半部分在不同物種之間存在一定差異。對14個物種比對顯示NPS前體在進化過程中相對保守，只

4、是在不同物種進化分支之間存在著局部差異，符合種屬間的進化親緣關(guān)系。
　　 2、用RT-PCR方法對兔體內(nèi)NPS及NPSR基因的表達進行了研究，結(jié)果顯示，NPS及NPSRmRNA在兔腦橋、下丘腦、垂體、腦干、脊髓、胃、膽囊、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、盲腸、心、肝、脾、肺、腎、睪丸、子宮、卵巢、主動脈、胰、唾液腺、甲狀腺、胸腺和乳腺等組織器官中均有表達，主要在中樞神經(jīng)系統(tǒng)表達，在外周組織器官低水平表達，該結(jié)果與在大鼠上獲得的結(jié)果基

5、本相似。
　　 3、用相對定量RT-PCR方法，對24只新西蘭白兔在熱應(yīng)激條件下（42℃，對照組、0.5h、1h和2h，n=6）下丘腦-垂體-腎上腺NPS及NPSRmRNA表達的變化規(guī)律進行了研究。結(jié)果如下
　　 新西蘭白兔在熱應(yīng)激條件下NPS及NPSRmRNA在下丘腦、垂體和腎上腺均有表達，但具有不同的表達模式。
　　 熱應(yīng)激后NPSmRNA在下丘腦表達水平逐漸升高，1h時表達豐度最高，與對照組差異極顯著（P<

6、0.01），隨后2h組下降。熱應(yīng)激后NPSmRNA在腎上腺0.5h組達到最高，與對照組差異極顯著（P<0.01），隨后呈下降趨勢。熱應(yīng)激后NPSmRNA在垂體具有不同的表達模式，實驗組均呈下降趨勢，且與對照組差異均為極顯著（P<0.01）。
　　 NPSRmRNA與NPS在下丘腦垂體腎上腺的表達模式趨于一致。
　　 以上結(jié)果表明兔NPS及其受體基因在進化上是保守的；熱應(yīng)激時NPS及其受體基因在HPA軸上的表達發(fā)生變化，提