組蛋白乙?;瘜π∈篌w外卵母細胞和胚胎發(fā)育的影響及早期胚胎組蛋白乙?;J降难芯?pdf_第1頁
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文檔簡介

1、組蛋白修飾作為表觀遺傳的一種主要方式,它在細胞分化、細胞癌變的發(fā)生、細胞多能性等諸多方面都有很好的詮釋。組蛋白乙?;欠g后修飾最為重要的方式之一,它有助于基因轉錄起始及染色質的重塑。組蛋白乙?;揎椩诓溉閯游锫涯讣毎某墒旒霸缙谂咛グl(fā)育尤為重要。然而,在哺乳動物中組蛋白乙酰化修飾在卵母細胞減數(shù)分裂和胚胎發(fā)育過程中的功能相關性研究卻鮮有報道。
  本研究揭示了組蛋白乙?;谛∈舐涯讣毎麥p數(shù)分裂和小鼠早期胚胎發(fā)育過程中組蛋白乙酰化動

2、態(tài)模式。(1)實驗使用不同濃度的組蛋白去乙?;敢种苿┒∷徕c,體外處理GⅤ期卵母細胞14小時。結果發(fā)現(xiàn),低濃度丁酸鈉(0.1,0.5,1.0mM)處理下,卵母細胞成熟率沒有顯著差異,然而5.0mM和10.0mM NaBu處理下成熟率分別為為53.3±2.93%、30.2±0.05% VS78.2±5.72%(對照組)。這些結果表明,丁酸鈉具有抑制小鼠卵母細胞減數(shù)分裂恢復并以劑量依賴的方式發(fā)生。(2)為了進一步研究丁酸鈉在卵母細胞減數(shù)分裂

3、GⅤ期至MⅠ期的影響,卵母細胞在不含丁酸鈉的培養(yǎng)液中培養(yǎng)3h后轉入2.0mM丁酸鈉5h,另一實驗組在2.0mM丁酸鈉體外培養(yǎng)8h。實驗結果發(fā)現(xiàn),空白對照組卵母細胞體外培養(yǎng)8h到第一次減數(shù)分裂中期,可檢測到圓錐狀紡錘體狀牽引著染色體,染色體整齊的排列在赤道板位置。相比于實驗組,染色體則混亂分布并呈凝集的狀態(tài),且伴隨異常的紡錘體出現(xiàn)。同時我們利用免疫蛋白印跡方法檢測MAPK磷酸化狀態(tài)。實驗結果顯示ERK1/2和P-ERK1/2蛋白水平隨丁酸

4、鈉處理時間增加而顯著下調(P<0.05)。
  利用免疫熒光技術分析并進一步確定小鼠體內胚、體外胚、孤雌胚組蛋白H3K9乙酰化動態(tài)模式。實驗結果發(fā)現(xiàn):在胚胎2-細胞與8-細胞階段,體內胚、體外胚及孤雌胚組蛋白H3K9乙?;經]有顯著差異。在胚胎4-細胞階段,體內胚組蛋白H3K9乙?;?0.76±0.27)顯著高于孤雌胚(0.29±0.78)(P<0.05)。桑葚胚和囊胚期,體外胚和孤雌胚組蛋白H3K9乙?;矫黠@低于體內胚

5、(P<0.05)。在8-細胞階段,三種胚胎的組蛋白H3K9乙?;_到最低水平。以上的結果表明,小鼠的體內胚、體外胚及孤雌胚組蛋白H3K9乙?;尸F(xiàn)動態(tài)變化的。
  本研究還評估了丁酸鈉對體外受精胚胎發(fā)育率的影響。并且對組蛋白乙?;{控基因HDAC1和多能性轉錄因子(Pou5f1,Sox2)mRNA表達進行了檢測。(1)受精卵置于2.0mM NaBu的KSOM+AA培養(yǎng)液處理24h。相比于空白對照組發(fā)現(xiàn),在卵裂率和桑葚胚率沒有明顯

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