組蛋白乙酰化對小鼠體外卵母細胞和胚胎發(fā)育的影響及早期胚胎組蛋白乙?；Ｊ降难芯?pdf

1、組蛋白修飾作為表觀遺傳的一種主要方式，它在細胞分化、細胞癌變的發(fā)生、細胞多能性等諸多方面都有很好的詮釋。組蛋白乙?；欠g后修飾最為重要的方式之一，它有助于基因轉錄起始及染色質的重塑。組蛋白乙?；揎椩诓溉閯游锫涯讣毎某墒旒霸缙谂咛グl(fā)育尤為重要。然而，在哺乳動物中組蛋白乙酰化修飾在卵母細胞減數(shù)分裂和胚胎發(fā)育過程中的功能相關性研究卻鮮有報道。
　　本研究揭示了組蛋白乙?；谛∈舐涯讣毎麥p數(shù)分裂和小鼠早期胚胎發(fā)育過程中組蛋白乙酰化動

2、態(tài)模式。(1)實驗使用不同濃度的組蛋白去乙?；敢种苿┒∷徕c，體外處理GⅤ期卵母細胞14小時。結果發(fā)現(xiàn)，低濃度丁酸鈉(0.1，0.5，1.0mM)處理下，卵母細胞成熟率沒有顯著差異，然而5.0mM和10.0mM NaBu處理下成熟率分別為為53.3±2.93％、30.2±0.05％ VS78.2±5.72％（對照組）。這些結果表明，丁酸鈉具有抑制小鼠卵母細胞減數(shù)分裂恢復并以劑量依賴的方式發(fā)生。(2)為了進一步研究丁酸鈉在卵母細胞減數(shù)分裂

3、GⅤ期至MⅠ期的影響，卵母細胞在不含丁酸鈉的培養(yǎng)液中培養(yǎng)3h后轉入2.0mM丁酸鈉5h，另一實驗組在2.0mM丁酸鈉體外培養(yǎng)8h。實驗結果發(fā)現(xiàn)，空白對照組卵母細胞體外培養(yǎng)8h到第一次減數(shù)分裂中期，可檢測到圓錐狀紡錘體狀牽引著染色體，染色體整齊的排列在赤道板位置。相比于實驗組，染色體則混亂分布并呈凝集的狀態(tài)，且伴隨異常的紡錘體出現(xiàn)。同時我們利用免疫蛋白印跡方法檢測MAPK磷酸化狀態(tài)。實驗結果顯示ERK1/2和P-ERK1/2蛋白水平隨丁酸

4、鈉處理時間增加而顯著下調(P＜0.05）。
　　利用免疫熒光技術分析并進一步確定小鼠體內胚、體外胚、孤雌胚組蛋白H3K9乙酰化動態(tài)模式。實驗結果發(fā)現(xiàn):在胚胎2-細胞與8-細胞階段，體內胚、體外胚及孤雌胚組蛋白H3K9乙?；經]有顯著差異。在胚胎4-細胞階段，體內胚組蛋白H3K9乙?；?0.76±0.27)顯著高于孤雌胚(0.29±0.78)(P＜0.05)。桑葚胚和囊胚期，體外胚和孤雌胚組蛋白H3K9乙?；矫黠@低于體內胚

5、(P＜0.05)。在8-細胞階段，三種胚胎的組蛋白H3K9乙?；_到最低水平。以上的結果表明，小鼠的體內胚、體外胚及孤雌胚組蛋白H3K9乙?；尸F(xiàn)動態(tài)變化的。
　　本研究還評估了丁酸鈉對體外受精胚胎發(fā)育率的影響。并且對組蛋白乙?；{控基因HDAC1和多能性轉錄因子(Pou5f1，Sox2)mRNA表達進行了檢測。(1)受精卵置于2.0mM NaBu的KSOM+AA培養(yǎng)液處理24h。相比于空白對照組發(fā)現(xiàn)，在卵裂率和桑葚胚率沒有明顯