女貞種質(zhì)資源遺傳多樣性的ISSR分析.pdf

1、女貞(Ligustrum lucidum Ait.)系木犀科(Oleaceae)女貞屬(Ligustrum Linn.)常綠灌木或小喬木植物,是一種珍貴的苦丁茶代茶飲料植物和藥用植物,具有多種藥用價值和保健功能。目前,由于環(huán)境變化及人類活動等的影響,其遺傳多樣性有逐漸喪失的危險。本試驗利用ISSR分子標記對女貞不同居群的種質(zhì)材料進行了研究,分析了其遺傳多樣性和親緣關系,為后續(xù)的女貞育種工作和種質(zhì)資源保護等提供理論依據(jù)。
　　 為

2、從女貞葉片中獲得可供后續(xù)分子生物學操作的基因組DNA,針對其組織細胞中富含多糖、多酚、有機酸等物質(zhì)的特點,采用改良CTAB法提取女貞基因組DNA。經(jīng)A26和A28值的測定,以及電泳檢測和PCR擴增,結果表明改良CTAB法所提取的DNA無論在純度上、完整性上都比較好。
　　 采用單因子試驗建立了一套適合于女貞的穩(wěn)定的ISSR-PCR反應體系::25μl反應體系中含10×buffer2.5μl,2.0～3.0 mmol.L-1 Mg

3、Cl2,150～300μmol·L-1dNTPs,1.0～1.5 U Taq酶,0.3～0.4μmol·L-1引物,5～320 ng DNA模板。PCR擴增程序為:94℃預變性4 min,94℃變性40 s,52～62℃(退火溫度隨引物不同而定)退火45 s,72℃延伸120 s,進行35個循環(huán),最后72℃延伸8 min,4℃保存。
　　 篩選出了擴增條帶清晰,穩(wěn)定性好的12條引物,對66份女貞種質(zhì)材料進行檢測,共擴增出237個

4、位點,平均每個引物擴增出19.75個位點,其中多態(tài)位點221個,多態(tài)位點百分率(PPB)為93.2％。DNA片段大小分布在150～2500bp之間。平均多樣性指數(shù)(I)為0.3151,遺傳相似系數(shù)(H)為0.2005,觀測等位基因數(shù)(Na)和有效等位基因數(shù)(Ne)分別為1.7222和1.3217。
　　 66份女貞種質(zhì)的遺傳相似性分析表明,絕大部分基因型間的Jaccard's相似系數(shù)在0.4～0.5之間。通過非加權算術平均數(shù)UP