牛口蹄疫病毒VP2-ELISA和3B表位串聯(lián)肽間接ELISA試劑盒的研制.pdf

1、口蹄疫（Footand Mouth Disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（Foot-and-mouthdisease，virus，F(xiàn)MDV）引起的以感染偶蹄動(dòng)物為主的急性、熱性、高度傳染性疫病。該病的發(fā)生和流行嚴(yán)重危害畜牧業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，該病被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織列為必須通報(bào)的多種動(dòng)物共患傳染病之一。從2005年起國(guó)內(nèi)不斷發(fā)生牛口蹄疫，目前面臨著Asia1型口蹄疫的持續(xù)危害、O型FMDV的復(fù)發(fā)感染、新型毒株A型的侵襲

2、風(fēng)險(xiǎn)。因此，國(guó)內(nèi)口蹄疫的防控任務(wù)艱巨。我國(guó)防控FMD主要采取疫苗免疫和抗體監(jiān)測(cè)為主的綜合防控政策，通過(guò)接種疫苗提高畜群整體抗體水平來(lái)預(yù)防口蹄疫的感染和傳播。因此?？谔阋吒腥镜目焖僭\斷、免疫效果評(píng)價(jià)、自然感染和疫苗免疫的鑒別診斷成為防控口蹄疫的關(guān)鍵技術(shù)。
　　 本研究通過(guò)pPROEXTMHTb表達(dá)載體在大腸桿菌DH5a中成功表達(dá)了FMDV的vp2基因，獲得大小為35ku的融合蛋白，Westernblot證實(shí)目的蛋白可與FMDV5種

3、血清型的牛陽(yáng)性血清發(fā)生特異性反應(yīng)。以此純化蛋白為抗原建立了牛FMDVVP2蛋白間接ELISA方法。特異性試驗(yàn)表明，該抗原不與常見(jiàn)的7種牛病陽(yáng)性血清發(fā)生交叉反應(yīng)。檢測(cè)非免疫無(wú)口蹄疫地區(qū)牛陰性血清特異性為100％；檢測(cè)感染血清敏感性為97.3％；與4種商品化試劑盒比較檢測(cè)O-Asia1二價(jià)滅活苗免疫牛血清364份，符合率分別為69.0％、95.0％、90.4％和86，8％。試驗(yàn)結(jié)果表明建立的ELISA方法可用于?？谔阋吒腥竞兔庖呖贵w檢測(cè)。<

4、br>　　 本研究利用實(shí)驗(yàn)室融合表達(dá)的3B表位串聯(lián)肽（8BF）為檢測(cè)抗原建立的間接ELISA為基礎(chǔ)，優(yōu)化組裝了一種特異、敏感的間接ELISA試劑盒。通過(guò)檢測(cè)大量未免疫、免疫健康牛血清和感染牛血清，確定了判定標(biāo)準(zhǔn)：S/P>0.3，陽(yáng)性：0.2

5、test（）FMDV-NSELISA、3ABC-I-ELISA符合率高達(dá)95％1與3ABC-I-ELISA進(jìn)一步比較檢測(cè)528份不同背景的牛血清，總符合率為94.5％（499/528）。大規(guī)模檢測(cè)不同來(lái)源的6個(gè)牛場(chǎng)共2026份臨床牛血清，部分牛群全部陰性，大多數(shù)牛群含有陽(yáng)性牛，陽(yáng)性率從3％到17％不等，個(gè)別感染牛群陽(yáng)性率高達(dá)72.2％。8BF-ELISA試劑盒方便、安全、實(shí)用，特異性和敏感性高，用于鑒別診斷牛FMD自然感染和疫苗免疫，為