棉酚對細(xì)毛羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞和精液品質(zhì)影響的研究.pdf

1、目的：棉酚在動物體內(nèi)蓄積到一定的程度，對動物機體產(chǎn)生中毒危害現(xiàn)象，從而影響生長發(fā)育和繁殖能力！飼喂棉籽殼后檢測對雄性細(xì)毛羊的精液品質(zhì)；分離出睪丸細(xì)胞，在體外進行培養(yǎng)，加入不同梯度棉酚對細(xì)胞的影響,查明在什么劑量下棉酚誘導(dǎo)細(xì)毛羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞發(fā)生凋亡和產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用。
　　 方法：本論文分兩大部分，
　　 第一部分做棉酚對細(xì)毛羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞的影響研究，具體通過：1.細(xì)毛羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定。2.MTT法檢測棉酚對

2、睪丸間質(zhì)細(xì)胞的增值的抑制作用。3.細(xì)毛羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞經(jīng)棉酚處理對乳酸脫氫酶和Na-K-ATP酶的影響。4.Heochst33342/PI試劑盒檢測對細(xì)毛羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞的影響。5.凝膠電泳檢測DNA Ladder。6.流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期。第二部分做飼喂棉籽殼（含有不同濃度的游離棉酚）對細(xì)毛羊精液品質(zhì)的影響研究。
　　 結(jié)果：MTT法檢測棉酚對睪丸間質(zhì)細(xì)胞的增值的抑制作用，1,左旋棉酚的作用：睪丸間質(zhì)細(xì)胞增值隨著棉酚濃

3、度的增加及作用時間的延長而明顯變化。256、512mg/l左旋棉酚作用24小時后能顯著抑制間質(zhì)細(xì)胞的增值（P＜0.5），作處理48小時64、128、256、512mg/l能顯著抑制間質(zhì)細(xì)胞的增值（P＜0.5），處理72小時只有512mg/l起到顯著抑制作用。2，消旋棉酚的作用：處理時間段也分三個，24、48、72，只有48小時64、128、256、512mg/l濃度的消旋棉酚對細(xì)毛羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞起到顯著的抑制作用（P＜0.5），其他兩個

4、時間段都沒有顯著作用，但從數(shù)據(jù)上看，也起到一定的抑制作用。
　　 左旋棉酚和消旋棉酚接觸細(xì)胞24h后，高濃度組棉酚對細(xì)胞內(nèi)Na-K-ATP酶影響差異顯著（P<0.05）。
　　 Heochst33342/PI試劑盒檢測結(jié)果，不同濃度消旋棉酚對睪丸間質(zhì)細(xì)胞處理48小時后，隨著棉酚的濃度的增加，壞死細(xì)胞的數(shù)量也跟著增加。
　　 凝膠電泳檢測DNA Ladder，經(jīng)不同濃度的消旋棉酚處理72小時后，提取DNA進行電泳分

5、析?？梢?％DMSO對照組及消旋棉酚處理組的細(xì)胞沒有出現(xiàn)梯狀帶型，但256mg/l、512mg/l組得基因組DNA含量明顯高于低劑量組（P<0.05）。
　　 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期。消旋棉酚作用于新疆細(xì)毛羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞后觀察到細(xì)胞周期改變，主要表現(xiàn)為S期細(xì)胞減少，G0/G1期細(xì)胞比例增加。256mg/l消旋棉酚作用48h時可見S期細(xì)胞比例明顯降低，同時G0/G1期細(xì)胞比例明顯增加，細(xì)胞進入增殖期減少，DNA合成速度減

6、慢，細(xì)胞被阻滯于G0/G1期。64mg/l消旋棉酚作用48h同樣出現(xiàn)上述改變，而4mg/l消旋棉酚對細(xì)毛羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞的周期沒有明顯影響。醋酸棉酚在抑制細(xì)毛羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞生長增殖同時觀察到上述細(xì)胞周期改變，其抑制間質(zhì)細(xì)胞增殖的機制可能與對間質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞周期的調(diào)控作用有關(guān)。
　　 第二部分做棉酚對細(xì)毛羊精液品質(zhì)的影響研究
　　 實驗一組即飼喂0.5kg棉籽殼（含游離棉酚218mg）和試驗二組即飼喂1kg棉籽殼（含游離棉酚43

7、6mg）公羊的精子活力,活精子率，pH值，與對照組(不喂棉籽殼)相比都有降低，但試驗一組與對照組差異不顯著（P>0.05），試驗二組與對照組差異顯著（P<0.05）。而在射精量，精子密度兩指標(biāo)上試驗一組都高于對照組和試驗二組，特別是在精子密度上，試驗一組顯著高于對照組和試驗二組（P<0.05）。
　　 結(jié)論：不同濃度及不同時間消旋棉酚和左旋棉酚對新疆細(xì)毛羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞的作用后的數(shù)據(jù)來看，消旋棉酚和左旋棉酚能抑制細(xì)胞的生長存活，且