BTH誘導(dǎo)橡膠樹對白粉病的抗性研究.pdf

1、橡膠白粉病是橡膠的重要病害之一,由橡膠粉孢屬(Oidium hevecae B.A.Steinm)侵染引起,嚴重影響橡膠樹生長和產(chǎn)量。誘導(dǎo)植物抗性是用生物和非生物因子激發(fā)植物的自身免疫力,達到防病的效果。利用誘導(dǎo)植物抗性來防治病蟲草害已成為植保技術(shù)的新途徑。
　　 本研究通過盆栽試驗,以橡膠品種熱研7-33-97和白粉菌為試驗材料,對BTH(苯并噻二唑)、PHDC(調(diào)環(huán)酸鈣)、禾甲安和碧護4種誘導(dǎo)劑進行篩選,并選用有效誘導(dǎo)劑BT

2、H對誘導(dǎo)間隔期、誘導(dǎo)次數(shù)和誘導(dǎo)抗性相關(guān)酶的活性進行了系列試驗。同時利用SSH(抑制消減雜交)技術(shù)構(gòu)建了BTH誘導(dǎo)的橡膠抗白粉病的葉片cDNA差減文庫,分析BTH誘導(dǎo)后橡膠抗白粉病的基因表達情況,試圖從分子水平揭示橡膠的抗病機制,為橡膠抗白粉病的防治和研究提供新方法。
　　 研究結(jié)果如下:
　　 1.BTH、PHDC、禾甲安和碧護4種誘導(dǎo)劑對橡膠白粉病均有一定的防治效果,其中BTH250mg/L和禾甲安500倍液的效果較好

3、,分別為57.8％和51.4％,但BTH顯著優(yōu)于禾甲安和其它處理。
　　 2.用BTH250mg/L處理橡膠芽接苗,不同接種時間間隔實驗結(jié)果表明,最佳誘導(dǎo)間隔期為5～11天,防治效果在33～57％,持續(xù)期至少11d。誘導(dǎo)后,隨著接種間隔期的延長,誘導(dǎo)抗病性的效果也在減弱。
　　 3.BTH250mg/L處理并接種病原菌后,POD(過氧化物酶)和PAL(苯丙氨酸解氨酶)的活性比對照顯著升高;當(dāng)酶活性下降至與對照無差異時,進

4、行第2次施藥,POD、PAL的活性會再次升高,抗病性增強。
　　 4.通過試劑盒RNAiso Reagent法、改良SDS法和改良CTAB-PVP法3種方法對橡膠葉片總RNA的提取進行比較后發(fā)現(xiàn),采用改良SDS法能去除葉片中含有的膠乳,有利于抑制消減雜交文庫的構(gòu)建。
　　 5.選用Clontech公司的PCR-select cDNA subtraction kit,構(gòu)建了BTH誘導(dǎo)的橡膠抗白粉病葉片cDNA文庫,并對SS

5、H的各個關(guān)鍵步驟如接頭連接效率、消減效率、轉(zhuǎn)化效率等的檢測結(jié)果顯示,差減文庫有較高的質(zhì)量。
　　 6.從文庫中隨機挑取42個陽性克隆進行測序,并在Genbank上對核酸序列比較后發(fā)現(xiàn),在已知功能的核酸序列中,有能量和基礎(chǔ)代謝類、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)類、膜和轉(zhuǎn)運類和次生代謝類共21條序列和2條重復(fù)序列,未知功能的有14條序列,數(shù)據(jù)庫中無顯著匹配的有2條序列。
　　 BTH通過誘導(dǎo)橡膠樹葉片防御相關(guān)基因的表達,提高抗性相關(guān)酶的活性,有效