α-法尼烯合成酶基因轉化豐產梨的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、α-法尼烯是一種存在于生物體中的倍半萜類物質,已知與植物的抗冷性、昆蟲的誘導及冷藏蘋果和梨果實重大生理病害-虎皮病的發(fā)生有關,是蘋果果實中重要的香氣成分之一。Α-法尼烯的生物合成是通過類異戊二烯途徑中的甲羥戊酸途徑,α-法尼烯合成酶是調控α-法尼烯合成的關鍵酶,催化FPP轉變?yōu)棣?法尼烯。
   本實驗根據Genbank中注冊的α-法尼烯合成酶基因全長序列設計特定引物,利用熒光定量PCR和Western雜交的方法,鑒定初步獲得轉

2、基因植株,并研究了生理特性。主要結果如下:
   (1)構建了pBI-AFS反義和RNAi表達載體,并轉化豐產梨,得到轉AFS基因的豐產梨植株。
   (2)以豐產梨組培苗為材料,優(yōu)化了豐產梨組培苗的生根及遺傳轉化體系,并成功將轉基因組培苗馴化移栽。最適宜豐產梨繼代的培養(yǎng)基為MS+BA1.0mg/L +IBA0.2mg/L+蔗糖30.0g/L+瓊脂6.0g/L,生根培養(yǎng)基為1/2 MS+IBA0.3mg/L+蔗糖30.0

3、g/L+瓊脂6.0g/L.
   (3)轉基因植株經過RT-PCR和熒光定量PCR分析表明,野生型中α-法尼烯合成酶基因的相對表達量最高,反義轉化植株中有所降低,RNAi轉化植株中α-法尼烯合成酶基因的相對表達量最低。
   (4)通過克隆青香蕉蘋果的α-法尼烯合成酶基因(AFS)片段,構建pEASY E1-AFS-原核表達載體,轉化大腸桿菌,制備抗體,進行了Western雜交分析,顯示該基因在蛋白水平成功表達。

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