河南省大豆疫霉的分離及鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、大豆疫霉(Phytophthora sojae Kaufmann et Gerdemann)是大豆上寄生性很強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)危害性大的重要病原卵菌之一。本學(xué)位論文在對(duì)河南省大豆疫霉進(jìn)行分離的基礎(chǔ)上,對(duì)不同地理來源的大豆疫霉的形態(tài)學(xué)進(jìn)行了鑒定及酯酶同工酶電泳,并對(duì)其核糖體DNA的ITS 序列分析,主要研究結(jié)果如下:
   采用殺菌劑作用下的大豆疫霉土壤葉碟誘捕法對(duì)河南省大豆田采集到的276 份土樣進(jìn)行了誘捕分離,共分離到菌株2 株,分離到

2、的菌株均分離自新鄉(xiāng)市封丘縣,分離出菌株的頻率為0.72%。
   對(duì)分離到的菌株運(yùn)用形態(tài)學(xué)鑒定和下胚軸傷口接種致病性的檢測(cè)方法對(duì)它們進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明分離到的菌株,菌絲無隔、呈近直角分枝、分枝處縊縮,可形成膨大體、直徑2.5~11.3μm,平均值為5.7μm。孢子囊頂生,無乳突,呈倒梨形,不脫落,內(nèi)層出。孢子囊長(zhǎng)25.0~64.6μm,平均為43.1μm,寬15.0~50.0μm,平均為26.9μm,長(zhǎng)寬比約為1.6。分離到的

3、這2個(gè)菌株均為同宗配合。藏卵器球形,直徑為25.0~46.3μm,平均為36.09μm,卵孢子圓形、淡黃色、直徑為22.5~36.8μm,平均為31.36μm;雄器大多側(cè)生,少數(shù)圍生。參考主要疫霉菌分類檢索表,將上述分離物鑒定為大豆疫霉(Phytophthora sojae)。致病性鑒定中,這2個(gè)菌株均對(duì)合豐35大豆品種具有致病性,發(fā)病癥狀與大田植株自然發(fā)病癥狀相同,根據(jù)柯赫氏法則可證實(shí)這2個(gè)菌株為大豆疫霉(Phytophthora s

4、ojae)。
   對(duì)分離到的菌株使用下胚軸接種法分別接種于14個(gè)含有不同抗病基因的大豆品種上,結(jié)果分離到的菌株分屬2個(gè)不同的致病型,其中編號(hào)為HN20的菌株的致病型為2,3a,3b,4,5,編號(hào)為HN32的菌株的致病型為1b,2,3c,4,5,6,7。
   使用大豆疫霉ITS 序列特異性引物對(duì)分離到的菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增,分離到的菌株能夠擴(kuò)增出一條300bp的條帶,測(cè)序比對(duì)后,證實(shí)分離到的菌株為大豆疫霉株。對(duì)分離到的菌

5、株和前期從山東分離到的菌株進(jìn)行酯酶同工酶分析,供試的7個(gè)菌株酯酶同工酶條帶具有相似性,它們共同擁有1 條Rf 值為0.526的特異性酶帶,而且沒有其他特異性酶帶存在。因此可以將酯酶同工酶分析做為鑒定大豆疫霉的輔助性手段。
   對(duì)分離到的2 株大豆疫霉的生物學(xué)特性進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明,分離到的大豆疫霉菌株對(duì)孔雀綠具有敏感性,當(dāng)濃度大于0.5μg/Ml 時(shí)幾乎完全抑制菌絲生長(zhǎng),當(dāng)濃度小于0.125μg/Ml,對(duì)菌絲生長(zhǎng)則幾乎沒

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