河南省大豆疫霉的分離及鑒定.pdf

1、大豆疫霉（Phytophthora sojae Kaufmann et Gerdemann）是大豆上寄生性很強(qiáng)、經(jīng)濟(jì)危害性大的重要病原卵菌之一。本學(xué)位論文在對(duì)河南省大豆疫霉進(jìn)行分離的基礎(chǔ)上，對(duì)不同地理來源的大豆疫霉的形態(tài)學(xué)進(jìn)行了鑒定及酯酶同工酶電泳，并對(duì)其核糖體DNA的ITS 序列分析，主要研究結(jié)果如下：
　　 采用殺菌劑作用下的大豆疫霉土壤葉碟誘捕法對(duì)河南省大豆田采集到的276 份土樣進(jìn)行了誘捕分離，共分離到菌株2 株，分離到

2、的菌株均分離自新鄉(xiāng)市封丘縣，分離出菌株的頻率為0.72％。
　　 對(duì)分離到的菌株運(yùn)用形態(tài)學(xué)鑒定和下胚軸傷口接種致病性的檢測(cè)方法對(duì)它們進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明分離到的菌株，菌絲無隔、呈近直角分枝、分枝處縊縮，可形成膨大體、直徑2.5~11.3μm，平均值為5.7μm。孢子囊頂生，無乳突，呈倒梨形，不脫落，內(nèi)層出。孢子囊長(zhǎng)25.0~64.6μm,平均為43.1μm,寬15.0~50.0μm,平均為26.9μm,長(zhǎng)寬比約為1.6。分離到的

3、這2個(gè)菌株均為同宗配合。藏卵器球形，直徑為25.0~46.3μm，平均為36.09μm，卵孢子圓形、淡黃色、直徑為22.5~36.8μm,平均為31.36μm；雄器大多側(cè)生，少數(shù)圍生。參考主要疫霉菌分類檢索表，將上述分離物鑒定為大豆疫霉(Phytophthora sojae)。致病性鑒定中，這2個(gè)菌株均對(duì)合豐35大豆品種具有致病性，發(fā)病癥狀與大田植株自然發(fā)病癥狀相同，根據(jù)柯赫氏法則可證實(shí)這2個(gè)菌株為大豆疫霉(Phytophthora s

4、ojae)。
　　 對(duì)分離到的菌株使用下胚軸接種法分別接種于14個(gè)含有不同抗病基因的大豆品種上，結(jié)果分離到的菌株分屬2個(gè)不同的致病型，其中編號(hào)為HN20的菌株的致病型為2,3a,3b,4,5，編號(hào)為HN32的菌株的致病型為1b,2,3c,4,5,6,7。
　　 使用大豆疫霉ITS 序列特異性引物對(duì)分離到的菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增，分離到的菌株能夠擴(kuò)增出一條300bp的條帶，測(cè)序比對(duì)后，證實(shí)分離到的菌株為大豆疫霉株。對(duì)分離到的菌

5、株和前期從山東分離到的菌株進(jìn)行酯酶同工酶分析，供試的7個(gè)菌株酯酶同工酶條帶具有相似性，它們共同擁有1 條Rf 值為0.526的特異性酶帶，而且沒有其他特異性酶帶存在。因此可以將酯酶同工酶分析做為鑒定大豆疫霉的輔助性手段。
　　 對(duì)分離到的2 株大豆疫霉的生物學(xué)特性進(jìn)行了初步研究。結(jié)果表明，分離到的大豆疫霉菌株對(duì)孔雀綠具有敏感性，當(dāng)濃度大于0.5μg/Ml 時(shí)幾乎完全抑制菌絲生長(zhǎng)，當(dāng)濃度小于0.125μg/Ml，對(duì)菌絲生長(zhǎng)則幾乎沒