定量PCR和Western blot結合檢測轉基因大豆植物組織和商業(yè)化大豆相關食品中CP4-EPSPS成分.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、隨著轉基因大豆（Roundup Ready Soya，簡稱RRS）的普及，食品中轉基因成分的標注成為了一項重要的安全議題。本研究采用CTAB試劑，對Biozol抽提法進行改良提取植物組織中的DNA、RNA和蛋白質;進而結合了定量PCR和Western blot來檢測轉基因大豆不同組織和不同大豆商業(yè)化食品中CP4-EPSPS基因和蛋白的表達。
　　 研究證明改良的Biozol一步法從玉米、大豆、苜蓿和黃瓜組織中不僅能一步提取得到相

2、應的RNA和蛋白質，DNA也有明顯的條帶。其中，獲得的RNA和DNA樣品經紫外分光光度計測定和瓊脂糖凝膠電泳分析證明純度較高，血紅素加氧酶(hemeoxygenase，HO)基因HO-1和鈣依賴蛋白激酶（calcium-dependent protein kinase，CDRK）基因CDRK1的RT-PCR結果呈陽性，所提取的蛋白質也可以用于Western blot分析，且整個提取過程只需3 h;與分別提取RNA、DNA和蛋白質的方法相

3、比，本一步法可同時分離單個樣品中的三種產品，避免了樣品間的誤差，而且提取所得的產物純度較高，為進一步的研究提供了便利。
　　 進而利用基因水平和蛋白水平兩種方法檢測不同大豆商業(yè)化食品中CP4-EPSPS基因和蛋白的表達。所檢食物制品包括轉基因植物源食品和同時含有大豆蛋白和肉品的食品。在驗證兩種方法的可用性之后，本研究實驗結果表明在部分所檢食物中至少有兩條蛋白降解條帶被檢測到（35.5和24.6 kD）。在豆腐皮和豆干樣品中，檢測

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