RNAi抑制絨山羊FGF5基因表達的研究.pdf

1、絨山羊所產(chǎn)山羊絨是天然的纖維資源，是一種高檔的紡織原料，具有較高的經(jīng)濟價值。絨長度、毛長度和絨毛細度是絨山羊的重要經(jīng)濟性狀，決定絨纖維的價格和絨毛品質(zhì)。許多研究發(fā)現(xiàn)FGF5基因參與毛囊生長發(fā)育調(diào)控，從而影響被毛形態(tài)。目前還沒有絨山羊FGF5基因敲除的報道，而且絨山羊的FGF5基因缺失后被毛是否會顯著生長仍然是一個懸而未決的問題。本研究從家畜育種角度出發(fā)，把能夠干擾抑制FGF5基因表達的RNAi載體導入絨山羊體細胞，利用體細胞克隆技術創(chuàng)造

2、出缺失FGF5基因的絨山羊，進而選育出產(chǎn)絨性能優(yōu)良的絨山羊新品系。
　　首先體外培養(yǎng)內(nèi)蒙古絨山羊胎兒皮膚成纖維細胞，同時合成干擾FGF5基因表達的pGCsilencerTM U6/Neo/GFP/ RNAi載體，脂質(zhì)體介導RNAi載體轉(zhuǎn)染絨山羊胎兒成纖維細胞，GFP和G418篩選表達綠色熒光的轉(zhuǎn)基因細胞，RT-PCR檢測轉(zhuǎn)基因細胞中FGF5基因的表達，將FGF5表達量顯著降低的轉(zhuǎn)基因細胞作為核供體，移入成熟、去核的絨山羊卵母細胞中

3、，得到克隆胚胎，進一步篩選綠色熒光胚胎移植到受體絨山羊子宮內(nèi)，觀察絨山羊受孕情況。
　　實驗結果：體外成功培養(yǎng)絨山羊胎兒皮膚成纖維細胞，經(jīng)G418篩選得到表達綠色熒光的轉(zhuǎn)FGF5 RNAi載體的細胞，轉(zhuǎn)基因細胞個體變大、形態(tài)不規(guī)則、生長速度降低，經(jīng)胰蛋白酶消化后迅速貼壁，與對照組比較有顯著性差異。經(jīng)RT-PCR檢測，轉(zhuǎn)基因細胞中FGF5基因的表達與對照組比較有顯著性差異。體細胞核移植獲得轉(zhuǎn)基因熒光克隆胚胎，胚胎移植后受體羊沒有妊娠