白芨細(xì)胞懸浮體系的建立及其次生代謝產(chǎn)物的測(cè)定.pdf

1、白芨是蘭科多年生草本植物，是我國(guó)珍貴的藥用植物，具有收斂止血、清熱解毒、消腫生肌之功效。其不僅具有很廣泛的藥用價(jià)值，同時(shí)也具有極高的觀賞價(jià)值，近年在國(guó)內(nèi)外花卉市場(chǎng)上十分走俏。目前白芨的栽培主要采用分株繁殖，繁殖系數(shù)低，生長(zhǎng)周期較長(zhǎng)，不宜進(jìn)行大規(guī)模的商業(yè)化生產(chǎn)。隨著植物組培技術(shù)和細(xì)胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展，白芨的試管繁殖已成為可能。本試驗(yàn)以白芨種子、假鱗莖、葉、根為外植體，誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得白芨的愈傷組織，從而建立白芨懸浮細(xì)胞系，并對(duì)其中次生代謝產(chǎn)

2、物白芨多糖和大黃素甲醚進(jìn)行了含量測(cè)定；研究不同水平和組合的激素、碳、氮源、磷源、細(xì)胞接種量等條件對(duì)白芨細(xì)胞生長(zhǎng)及其白芨多糖，大黃素甲醚合成的影響，從而建立了白芨懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)及其白芨多糖，大黃素甲醚合成的動(dòng)態(tài)曲線(xiàn)。具體研究結(jié)果如下:
　　1.用1/2 MS+2.0 mg/L2,4-D+0.2 mg/L NAA+1.8 mg/L6-BA培養(yǎng)基可獲得大量繁殖速度快，生長(zhǎng)均勻一致的愈傷組織。
　　2.白芨細(xì)胞懸浮培養(yǎng)條件的優(yōu)化:34

3、0 mg/L KH2PO4+3300 mg/L NH4NO3+100 mg/L肌醇+30 g/L蔗糖改良的1/2 MS為基本培養(yǎng)基并添加10％土豆汁，激素配方為0.2 mg/L NAA+1.0 mg/L6-BA+2.0 mg/LIBA，配合每20mL培養(yǎng)液中接種0.0038 g(DW)/L左右的細(xì)胞，為最適培養(yǎng)條件。
　　3.白芨多糖，大黃素甲醚的檢測(cè)體系，采用蒽酮-硫酸法測(cè)定總糖，3,5-二硝基水楊酸法測(cè)定還原糖；多糖=總糖－還

4、原糖，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)約48d時(shí)，測(cè)得白芨多糖為3.72 mg(DW)/L。用HPLC法來(lái)測(cè)定大黃素甲醚的含量。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)約30d時(shí)，培養(yǎng)1g干重細(xì)胞含大黃素甲醚8.12μg。
　　4.以最適培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，建立白芨懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)及其白芨多糖，大黃素甲醚合成的動(dòng)態(tài)曲線(xiàn).表明：0～6d為生長(zhǎng)延遲期，6～27d為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，27～39d為生長(zhǎng)穩(wěn)定期，在27d白芨細(xì)胞生長(zhǎng)到達(dá)曲線(xiàn)頂峰，即可獲得最大的白芨細(xì)胞生物量2.79