山羊zfp36基因的克隆、表達及組織表達譜研究.pdf

1、鋅指蛋白基因zfp36是一類具有手指狀結構域的轉錄因子,在基因表達調控、細胞分化、胚胎發(fā)育、增強植物抗逆性等方面具有重要的作用,該基因在小鼠和人與關節(jié)炎、自身免疫疾病、骨質增生等綜合癥相關。但是目前有關山羊zfp36基因的研究未見報道。對山羊zfp36基因進行結構分析、探討其變異情況及種群特異性,研究該基因的組織表達差異,可為今后進一步開展該基因功能研究奠定基礎。
　　 本研究運用RT-PCR方法克隆了山羊zfp36基因的編碼區(qū)

2、序列;運用Bioedit、BLAST、SMART、ProtParam、SCOPMA等在線工具和軟件,對山羊zfp36基因進行生物信息學分析;結果顯示,山羊zfp36基因的編碼區(qū)長度為978bp,編碼325個氨基酸;同源比對發(fā)現(xiàn)山羊zfp36基因與人類、豬、牛、綿羊和大鼠的核苷酸序列一致性分別達到86％、89%、98%、99%、82%。以濟寧青山羊、雷州黑山羊、南江黃羊、遼寧絨山羊為研究對象,運用PCR-SSCP方法檢測其品種問多態(tài)性,并

3、探討不同基因型在品種間的分布規(guī)律;結果顯示在外顯子未發(fā)現(xiàn)SNPs,在內含子上檢測到了一個SNPs位點,為A/T堿基置換,群體遺傳學分析表明其突變頻率分布具有品種特異性。通過構建zfp36基因編碼區(qū)的重組原核表達載體pet30-a-zfp36,并對表達條件進行優(yōu)化,利用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測出成功表達的山羊ZFP36蛋白。運用實時定量RT-PCR方法研究了山羊zfp36基因在心、肝、脾、肺、腎、腦、腸、胃8個組織中的表達情況,結果顯示,z