異育銀鯽皮膚粘孢子蟲病的病原和組織病理研究.pdf

1、異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)是銀鯽卵子與異源精子所產(chǎn)的后代。江蘇省揚州地區(qū)是生產(chǎn)異育銀鯽魚苗魚種的主要地區(qū)之一,每年為異育銀鯽成魚養(yǎng)殖地區(qū)提供大量的魚苗和魚種。異育銀鯽繁殖期為每年的4月下旬至5月中旬,近幾年的6月上旬左右起,該地區(qū)培育過程中的異育銀鯽魚苗體表會出現(xiàn)一種由粘孢子蟲寄生而出現(xiàn)孢囊的疾病,發(fā)病使得魚體變形、消瘦、游動困難,嚴重時導致魚苗大量死亡,累積死亡率約在10％-60%,魚苗死亡以及病魚

2、銷售困難給魚苗養(yǎng)殖戶帶來巨大的經(jīng)濟損失。因此有必要開展該病的病原和病理研究,為進一步的研究和防治該病的發(fā)生提供基礎。
　　為了確定粘孢子蟲在何種條件下進行形態(tài)學觀察和測量時最精確,本文以引起該粘孢子蟲病的病原粘孢子蟲作為樣本,將其新鮮成熟孢子用生理鹽水制成的水浸片作為對照組,將蒸餾水制成的新鮮孢子水浸片,中性甲醛、70%酒精、95%酒精、Bouin’s液、2.5%戊二醛、A.F.F液和G.A.F液保存24小時后孢子的孢子長、寬、厚

3、、極囊長和寬的測量數(shù)據(jù)分別與對照組進行統(tǒng)計學分析,結果表明,蒸餾水對孢子的形態(tài)略微膨脹,但影響不大;所有的固定液均會對孢子的形態(tài)產(chǎn)生影響,中性甲醛、酒精、Bouin’s液和2.5%戊二醛會使孢子產(chǎn)生一定收縮,95%酒精使孢子收縮最嚴重,70%酒精和Bouin’s液次之;2.5%戊二醛對于保存后的粘孢子蟲的形態(tài)影響最小,最適于保存孢子;中性甲醛對孢子形態(tài)的影響稍大于2.5%戊二醛,但在沒有條件使用2.5%戊二醛時,也可用中性甲醛替代。

4、r>　　在確定了鑒定方法后,通過光鏡、掃描電鏡和18S rDNA序列對比,確定該病原粘孢子蟲為武漢單極蟲(Thelohanellus wuhanensis),并對其進行了形態(tài)學重描述和系統(tǒng)發(fā)育分析。成熟孢子殼面觀為瓜子狀,前端狹窄而尖銳,后部鈍圓,兩片殼瓣前端形狀不對稱,其中一個殼瓣前端有乳頭狀突起,縫面觀為厚梭形,縫脊直,孢子殼瓣底部內側有1-4個“V”形褶皺,部分孢子后部包圍有膜狀鞘,膜狀鞘兩側起始的位置不同,離孢子前端的垂直距離為

5、5.03-16.69(10.37±2.36)μm。極囊1個,近似球形,位于孢子前端,極絲7-10圈。2個圓形或近三角形的極囊核,分別位于極囊后部左右兩側。Lugol’s碘液染色后嗜碘泡呈棕黃色,形狀為圓形或橢圓形。孢子的測量結果:孢子長21.92-26.93(24.55±0.95)μm,孢子寬11.43-15.48(13.72±0.98)μm,孢子厚10.83-14.14(11.80±0.45)μm;極囊長9.64-12.79(11.5

6、4±0.68)μm,極囊寬8.14-10.28(9.12±0.45)μm,極絲長158.49-179.22(170.71±5.67)μm(n=20),膜狀鞘外表面距孢子殼瓣表面最遠距離為1.73-4.39(2.73±0.60)μm。亞甲基藍染色表明極絲為中空管狀。獲得了部分18S rDNA序列,GenBank登錄號為JQ088179,經(jīng)18S rDNA序列分析對比,與已報道的T. wuhanensis[HQ613410]和[AY1651

7、81]相似度分別為99.87%和97.36%。本文依據(jù)形態(tài)學以及18S rDNA序列信息確定了該孢子蟲的分類地位。系統(tǒng)發(fā)育分析顯示,單極蟲與碘泡蟲具有非常近的親緣關系,將單極蟲屬與碘泡蟲屬二者歸屬于碘泡科的分類方法更合理。
　　5月下旬至6月中旬為發(fā)病初期,此時孢囊很小,僅導致皮膚微微隆起。隨后孢囊開始增大,表面分布有少量黑色斑點。孢囊為橢圓形,位于皮膚真皮層的疏松結締組織中,孢囊周圍的疏松結締組織增生,其中可見較多的黑色素細胞。

8、孢囊膜為由結締組織形成的非細胞結構。早期時,產(chǎn)孢體多位于孢囊膜附近,隨著發(fā)展,產(chǎn)孢體進入孢囊內,位于內部的產(chǎn)孢體會比孢囊膜附近的產(chǎn)孢體更早地形成成熟孢子。成熟孢子由雙產(chǎn)孢體或四核產(chǎn)孢體發(fā)育形成。7月中下旬至8月中旬為發(fā)病高峰期,此時孢囊飽滿,表面有大而密集的黑色斑點,孢囊直徑最大超過1.7mm,孢囊數(shù)最多可達30個以上。除皮膚和鰭外,其它組織器官未發(fā)現(xiàn)孢囊和孢子。較大的孢囊導致鱗片彎曲,有的孢囊也會受鱗片擠壓而變形。有時兩個孢囊相互靠近

9、而融合。孢囊周圍增生的疏松結締組織中存在毛細血管增生現(xiàn)象。黑色素細胞較初期更多。孢囊附近存在一種未知的團狀物。孢囊內存在大量成熟孢子,但孢囊膜附近仍存在產(chǎn)孢體。約8月中旬開始疾病進入消退期,孢囊開始逐漸萎縮、消失。此時孢囊周圍存在較之前更多更密集的黑色素細胞,導致孢囊表面顏色變黑。孢囊中只有成熟孢子。隨著疾病消退,孢囊膜消失,由上皮細胞取而代之。到消退晚期,上皮細胞膜出現(xiàn)缺口,孢子從缺口中流出。孢子消失后,孢囊仍然會存在一段時間。孢囊消