大白菜BrTCP24基因克隆及功能分析.pdf

1、TCP家族轉(zhuǎn)錄因子是植物所特有的，它含有一種特有的bHLH保守結(jié)構(gòu)域。植物的葉片彎曲以及大小都可能受到TCP基因家族的影響。本試驗(yàn)從大白菜自交系福山包頭中分離了擬南芥(Arabidopsisthaliana)TCP的同源基因，命名為BrTCP24，并構(gòu)建了BrTCP24基因的植物表達(dá)載體。將該基因轉(zhuǎn)入擬南芥，獲得了相應(yīng)的純合轉(zhuǎn)基因植株，對(duì)轉(zhuǎn)基因植株與野生型的表型性狀進(jìn)行觀察比較，并且在生物信息學(xué)方面對(duì)BrTCP24基因做了相關(guān)分析。主要

2、結(jié)果如下:
　　 1.BrTCP24基因的克隆
　　 擴(kuò)增出一條分子質(zhì)量約為1200bp的條帶，經(jīng)測(cè)序，該片段為1221bp，與預(yù)期的目的片段大小一致。經(jīng)PCR、酶切及測(cè)序驗(yàn)證，證明BrTCP24基因片段已經(jīng)連接到植物表達(dá)載體pCAMBIA2300上。
　　 2.PCR鑒定轉(zhuǎn)基因擬南芥
　　 采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的浸花法侵染擬南芥，獲得了轉(zhuǎn)基因植株。提取轉(zhuǎn)基因擬南芥總RNA，并成功擴(kuò)增到外源BrTCP24基

3、因。
　　 3.氨基酸序列分析
　　 對(duì)BrTCP24基因所編碼的蛋白質(zhì)氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)分析，結(jié)果表明大白菜BrTCP24蛋白質(zhì)與擬南芥AtTCP4蛋白質(zhì)的氨基酸序列的一致性為77.57％，核酸的一致性為77.15％。
　　 4.BrTCP24基因過(guò)量表達(dá)可能抑制了與器官大小有關(guān)的基因表達(dá)
　　 通過(guò)半定量RT-PCR檢測(cè)了跟器官體積大小有關(guān)的基因AtEXP10，還有與細(xì)胞分裂有關(guān)的基因AtCYCD3;

4、1，AtG1F1和AtGRF5。與對(duì)照擬南芥相比，轉(zhuǎn)基因擬南芥中AtEXP10，AtCYCD31,AtGIF1和AtGRF5基因的表達(dá)水平減弱。這些結(jié)果表明在擬南芥的發(fā)育過(guò)程中，BrTCP24基因的過(guò)量表達(dá)可能抑制了與器官大小有關(guān)的基因的表達(dá)從而使擬南芥器官變小。
　　 5.轉(zhuǎn)基因植株的性狀觀察
　　 在含Kn的1/2MS培養(yǎng)基上，篩選植株暗處理7天，同時(shí)篩選5株長(zhǎng)勢(shì)好的植株，將其移入新的培養(yǎng)基和培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)兩周，觀