抗草甘膦基因甜菜遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、種植田中的雜草是導致甜菜產(chǎn)量和含糖量下降的重要原因之一。通過基因工程手段獲得抗草甘膦除草劑的甜菜品種成為有效的除去田間雜草，解決雜草對甜菜產(chǎn)量和含糖的影響。本研究以甜菜無菌苗的葉柄為外植體材料，通過農(nóng)桿菌介導方法將EPSPS基因轉(zhuǎn)入甜菜外植體內(nèi)，對農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化條件、方法及甜菜外植體再生條件進行較為系統(tǒng)地比較研究，建立與優(yōu)化了轉(zhuǎn)基因甜菜再生體系，從而獲得轉(zhuǎn)基因甜菜的再生植株。
　　 1、轉(zhuǎn)基因甜菜再生體系的建立與優(yōu)化
　　

2、本研究利用DM1-9、O-68和DY5-O三種不同基因型的甜菜品系為試驗材料。通過對三個品系甜菜不同部位、不同培養(yǎng)基和不同苗齡進行試驗，總結(jié)出最適合應用于轉(zhuǎn)基因條件的甜菜品系為DM1-9和O-68。轉(zhuǎn)基因甜菜材料外植體制備用無菌苗培養(yǎng)的優(yōu)化方法為：以DM1-9和O-68為材料，利用篩選出的薦生培養(yǎng)基MS+1mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+100mg/LKan+500mg/LCb、繼代培養(yǎng)基MS+6-BA0.5mg/L+NAA1.

3、0mg/L+100mg/LKan+500mg/LCb及生根培養(yǎng)基MS+1.0mg/LNAA使得該甜菜品系達到最大的轉(zhuǎn)化效率。通過農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)基因試驗，篩選出轉(zhuǎn)基因操作時最佳的農(nóng)桿菌侵染條件為：OD600=0.3時侵染10min。
　　 2、外植體中農(nóng)桿菌的最佳去除方法
　　 篩選出農(nóng)桿菌與甜菜外植體共培養(yǎng)操作后的農(nóng)桿菌最佳去除方法為：500mg/LCB清洗1次無菌水沖洗3次,300mg/LCef清洗1遍，無菌水沖洗3次后