豬附紅細胞體生物學特性的研究及間接ELISA方法的建立.pdf

1、本試驗探討了影響豬附紅細胞體的感染率的因素，并以RPMI-1640作為基礎培養(yǎng)基，對分離的豬附紅細胞體進行體外培養(yǎng)，并獲得成功。將體外培養(yǎng)成功的附紅細胞體，經(jīng)過分離提純，測得膜蛋白有4條主蛋白帶，另外還有2條次等蛋白帶。經(jīng)過處理的豬附紅細胞體作為包被抗原，對豬附紅細胞體間接ELISA各項反應條件進行了摸索，確定了最適工作濃度。研究結果表明：豬附紅細胞體在以RPMI-1640為基礎培養(yǎng)液的完全培養(yǎng)基中生長良好；附紅細胞體抗原最佳包被濃度為

2、38.75ug/ml，血清最佳稀釋度為1：80，血清反應時間為1小時，封閉液選擇1％BSA封閉1小時，酶標二抗最佳稀釋度為1：3200，底物反應時間確定為15min。陰陽性臨界值為0.33。與HCV、PRRSV和大腸桿菌的標準陽性血清呈陰性反應，與豬附紅細胞體標準陽性血清呈陽性反應，證明該方法具有良好特異性。ELISA方法與常規(guī)鏡檢方法相比較，其檢出率是鏡檢的1.76倍，證明ELISA作為診斷豬附紅細胞體的一種方法具有靈敏、快速的優(yōu)點，