錳缺乏對肉仔雞脛骨生長板軟骨細胞發(fā)育相關因子的影響.pdf

1、為研究錳缺乏對肉仔雞脛骨生長板發(fā)育的影響，探討錳缺乏導致脛骨發(fā)育障礙的信號機制，本研究主要從軟骨細胞增殖、軟骨細胞凋亡和軟骨細胞外基質(zhì)降解三個方面著手，探討了錳缺乏對脛骨生長板發(fā)育相關因子的影響，為系統(tǒng)研究錳缺乏導致肉雞脛骨“短粗癥”的發(fā)生機理提供一定的科學依據(jù)。
　　 90只1日齡Arbor Acres雛雞隨機分為三組，并分別給予以下日糧：對照日糧(60mgMn/kg)，錳缺乏日糧(40mgMn/kg，錳缺乏Ⅰ組；8.7mgM

2、n/kg，錳缺乏Ⅱ組)。每天給予24h光照，保證充足的日糧和飲水。飼喂42天后，取脛骨生長板。用游標卡尺測量生長板厚度，用測微尺測量生長板增殖區(qū)和肥大區(qū)寬度。然后將其固定于4％福爾馬林中，石蠟包埋，5um切片。石蠟切片用于HE染色和免疫組化。取大約0.2g脛骨生長板迅速放入液氮中保存，用于RNA的提取。另外一些生長板樣品在2.5％戊二醛固定24h，環(huán)氧樹脂包埋，通過電鏡對生長板軟骨細胞進行超微檢查。用TUNEL法檢測生長板軟骨細胞的凋亡

3、情況；用免疫組化法檢測P21、Bcl-2、cbfα1、CDMP-1、MMP-1、Cx43、PTHrP蛋白的表達；用實時熒光定量RT-PCR方法檢測P21、Bcl-2基因的表達。實驗結果如下：
　　 (1)錳缺乏導致肉仔雞脛骨生長板以及生長板的增殖區(qū)和肥大區(qū)厚度顯著變窄(P<0.05)。
　　 (2)與對照組相比，低錳組P21的表達顯著增多(P<0.05)；CDMP-1的表達量減少，但三組間沒有顯著差異(P>0.05)；C

4、x43的表達量顯著增多(P<0.05)；PTHrP的表達量顯著減少(P<0.05)；cbfα1的表達量減少；MMP-1顯著增多(P<0.05)。
　　 (3)錳缺乏導致肉仔雞脛骨生長板軟骨細胞線粒體外膜模糊不清，線粒體嵴發(fā)生斷裂；TUNEL法表明，錳缺乏組肉仔雞脛骨生長板軟骨細胞凋亡率顯著增高(P<0.05)；與對照組相比，低錳組Bcl-2的相對表達顯著減少(P<0.05)，兩低錳組間Bcl-2的相對表達量無顯著差異(P>0.0