花生促生內(nèi)生細(xì)菌的篩選和多樣性分析.pdf

1、植物內(nèi)生細(xì)菌是廣泛定殖的各種健康植物的組織和器官中，與寄主植物和諧共存、相互影響的一類微生物，是具有促生和提高植物抗病抗逆能力的有益微生物資源。為了篩選花生促生內(nèi)生細(xì)菌，得到有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的應(yīng)用菌株，本研究以幼苗期、開花下針期、莢果期和成果期四個(gè)生育時(shí)期的花生植株為材料，篩選IAA產(chǎn)生菌、拮抗菌和產(chǎn)鐵載體細(xì)菌；采用16S-RFLP和16SrDNA系統(tǒng)發(fā)育分析對(duì)花生植株的各個(gè)生育期的內(nèi)生細(xì)菌多樣性進(jìn)行了初步研究。
　　 通過(guò)75％

2、的乙醇和3％次氯酸鈉相結(jié)合的方法對(duì)花生植株進(jìn)行表面消毒處理，結(jié)果顯示，75％乙醇浸泡3min，3％次氯酸鈉溶液處理2min，75％乙醇浸泡30s的處理方法能很好的達(dá)到消毒效果。
　　 采用R2A培養(yǎng)基分離花生內(nèi)生細(xì)菌，結(jié)果顯示，內(nèi)生細(xì)菌的菌落密度在2.6×104cfu/g
　　 FW到7.1×104cfu/gFW之間，其中成果期內(nèi)生細(xì)菌的數(shù)量最少為2.6×104cfu/gFW，莢果期內(nèi)生細(xì)菌的數(shù)量最多為7.1×104cf

3、u/gFW。結(jié)合菌落和細(xì)菌形態(tài)觀察，共純化分離得到94株內(nèi)生細(xì)菌，其中幼苗期22株、開花下針期28株、莢果期30株、成果期14株。16S-RFLP分析發(fā)現(xiàn)，94株內(nèi)生細(xì)菌在92％的水平上聚為14個(gè)大群，而在100％的水平上聚為29個(gè)群。根據(jù)聚類分析圖，選擇31株代表性菌株進(jìn)行了16SrDNA序列測(cè)定，結(jié)果顯示，94株內(nèi)生細(xì)菌共分為14個(gè)屬，至少26個(gè)種。其中芽孢桿菌屬(Bucillus)為優(yōu)勢(shì)菌群，且在這四個(gè)生育期都有分離到。腸桿菌屬(

4、Enterobacter)只在花生幼苗期分離到；微小桿菌屬(Exiguobacterium)、不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)只在開花下針期分離到；黃桿菌屬(Flavobacterium)只在莢果期分離到；根瘤菌屬(Rhizobium)、細(xì)桿菌屬(Microbacterium)和伯克氏菌屬(Burkholderia)只在成果期分離到。而節(jié)桿菌屬(Arthrobacter)在幼苗期和莢果期都能分離到，而在另外兩個(gè)生育期沒(méi)有分離到。

5、
　　 本實(shí)驗(yàn)共分離到48株具有產(chǎn)LAA能力的菌株，14株拮抗菌，3株產(chǎn)鐵載體菌株。其中產(chǎn)IAA能力較強(qiáng)(>50mg-L-1·OD600-1)的菌株主要是巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)，成團(tuán)泛生菌(Pantoea agglomerans)、阿氏腸桿菌(Enterobacter asburiae)和根瘤菌屬(Rhizobium sp.)。14株拮抗菌中，2株對(duì)花生白絹病原菌(Sclerotium，rolfs

6、ii)有較弱的拮抗效果，12株對(duì)辣椒根腐病原菌(Fusarium solani)、蘋果炭疽病原菌(Colletotrichum gloeosporioides)、芹菜灰霉病原菌(Botrytis cinereaPers.)和黃瓜霜霉病原菌(Pseudoperonospora cubensis)有拮抗效果。3株鐵載體產(chǎn)生菌都屬于假單胞菌屬(Pseudomonas)。其中2株菌同時(shí)具有產(chǎn)生鐵載體能力、產(chǎn)IAA和拮抗能力；11株菌同時(shí)具有產(chǎn)生