綿羊YAP1基因與肌肉生長(zhǎng)相關(guān)基因表達(dá)相關(guān)分析以及載體構(gòu)建的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以湖羊?yàn)檠芯繉?duì)象，利用基因克隆技術(shù)克隆綿羊YAP1基因cDNA全長(zhǎng)序列，并利用生物學(xué)分析軟件對(duì)綿羊YAP1基因與其他物種的同源性，其蛋白的理化性質(zhì)，二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了生物信息學(xué)分析;利用熒光定量PCR技術(shù)對(duì)綿羊YAP1基因在出生后二日齡，二月齡和六月齡不同公母在四種不同骨骼?。ū匙铋L(zhǎng)肌、比目魚(yú)肌、腓腸肌、趾長(zhǎng)伸?。┑南鄬?duì)表達(dá)進(jìn)行了分析;并利用RT-PCR、載體構(gòu)建和定點(diǎn)突變技術(shù)，構(gòu)建了pEGFP-C1-YAP1，及其磷酸化位

2、點(diǎn)突變體pEGFP-C1-YAP1 S42A真核表達(dá)載體。旨在探索YAP1在綿羊出生前和出生后肌肉生長(zhǎng)過(guò)程中的調(diào)控機(jī)制，為湖羊肌肉生長(zhǎng)性狀的選育提供遺傳學(xué)資料。本研究獲得了一下結(jié)果:
　　1.克隆獲得綿羊YAP1基因序列全長(zhǎng)為1712 bp，其中包括編碼區(qū)1212bp，5' UTR27bp和3' UTR473bp，共編碼403個(gè)氨基酸。同源性分析發(fā)現(xiàn)，綿羊YAP1核苷酸序列與推測(cè)的氨基酸序列與灰倉(cāng)鼠的同源性最高，分別達(dá)到78.77

3、％和92.51％，而與人、黑猩猩的一致性差異較小。氨基酸序列分析得到，綿羊YAP1基因編碼蛋白為水溶性蛋白，相對(duì)分子量為44079.0Da，理論等電點(diǎn)為4.91，無(wú)信號(hào)肽序列和跨膜區(qū);亞細(xì)胞定位主要在細(xì)胞核，不屬于分泌蛋白;預(yù)測(cè)含有33個(gè)磷酸化位點(diǎn)，7個(gè)糖基化位點(diǎn)，具有兩個(gè)WW結(jié)構(gòu)域，二級(jí)結(jié)構(gòu)以無(wú)規(guī)則卷曲為主，三級(jí)結(jié)構(gòu)顯示，YAP1結(jié)構(gòu)域區(qū)構(gòu)成彎曲狀螺旋結(jié)構(gòu)。預(yù)測(cè)YAP1蛋白主要在調(diào)節(jié)功能過(guò)程中有著關(guān)鍵作用。
　　2.綿羊YAP1

4、基因在不同肌肉中的表達(dá)存在顯著差異，其中在腓腸肌中相對(duì)表達(dá)最高，在背最長(zhǎng)肌中最低，在不同生長(zhǎng)階段（二日齡、二月齡和六月齡）的比較中，YAP1的表達(dá)隨月齡的增加而升高。YAP1在公母間表達(dá)的差異不顯著。YAP1與肌球蛋白重鏈(MyHCⅠ、ⅡA、ⅡX)、MSTN、MyoG的表達(dá)關(guān)聯(lián)性分析表明，YAP1與MyHCⅠ呈極顯著負(fù)相關(guān)，與MyHCⅡ X、MSTN、MyoG呈極顯著正相關(guān)，揭示YAP1與出生后肌纖維的發(fā)育有關(guān)聯(lián)，可能參與了肌球蛋白重鏈