青海湖裸鯉鈣調蛋白磷酸酶(Calcineurin,CN)的克隆、表達、和功能研究.pdf

1、青海湖裸鯉是分布于青海湖及其周邊流域的唯一的經(jīng)濟魚類,在魚-鳥-草地生態(tài)系統(tǒng)中處于核心地位。開展青海湖裸鯉基礎生物學特征和適應低氧、低溫、高鹽度的分子機理的研究,有助于揭示青海湖裸鯉的基本生命活動規(guī)律,為該魚種的資源保護和人工增殖放流提供理論依據(jù)。
　　為了在基因功能研究中得到可靠地內參基因,通過RT-PCR和RACE方法得到了青海湖裸鯉三磷酸甘油醛脫氫酶(Gp-GAPDH)基因兩種異形體的完整編碼序列,分別命名為Gp-GAPDH

2、α(JX287372)和Gp-GAPDHβ(JX287373),同時對于Gp-GAPDHα和Gp-GAPDHβ在不同的組織和受精卵發(fā)育不同階段的表達量進行研究,發(fā)現(xiàn)Gp-GAPDHα與Gp-GAPDHβ在青海湖裸鯉不同組織和受精卵發(fā)育不同階段表達量存在較大差異,尤其Gp-GAPDHβ在受精卵發(fā)育不同階段差異顯著。初步斷定Gp-GAPDHβ不適合作為參照基因,而Gp-GAPDHα表達穩(wěn)定性需要進一步研究,選擇其作為參照基因需謹慎。

3、　　鈣調蛋白磷酸酶(CN),是由催化亞基(CN A)和調節(jié)亞基(CN B)組成的異二聚體的蛋白酶,它在多項生理過程中發(fā)揮重要作用,是一個多功能的信號酶,它可被Ca2+和鈣調蛋白所激活。從青海湖裸鯉鰓組織通過RT-PCR和RACE方法克隆得到了CNA的兩個旁系同源體(GpCAα and GpCAγ)基因序列以及CNB序列,通過real time方法研究了其在胚胎發(fā)育不同階段和鹽度適應過程中的表達模式,同時通過免疫組化方法確定了其在腎臟、心

4、臟、腦子、精巢和鰓等不同組織中的分布特征。結果發(fā)現(xiàn),青海湖裸鯉卵細胞受精后,GpCAα、GpCAγ和GpCB三種基因都在胚胎發(fā)育中持續(xù)性表達,同時表現(xiàn)為先降后升的趨勢,GpCAα和GpCB在神經(jīng)胚期表達量達到最小,相比之下,GpCAγ則在原腸胚期表達量最少。在鹽度的適應過程中,GpCAα和GpCAγ表達量隨著鹽度的逐漸升高而升高,而GpCB表達量在脅迫初期升高之后卻有下降的趨勢。通過免疫組織化學方法確定了CN在青海湖裸鯉腎、心臟、腦子、