甘藍型油菜逆境相關轉錄因子基因BnNAC5-3的克隆與功能鑒定.pdf

1、干旱、高鹽等非生物逆境嚴重影響作物的產量和品質。國內外育種者家一直致力于提高作物的抗逆性。隨著轉基因技術的不斷完善和應用，利用轉基因技術對作物進行定向改良的報道越來越多，但通過轉基因技術提高甘藍型油菜抗逆性的報道還比較少。NAC轉錄因子可以提高生物抗逆能力，因此本研究通過同源序列法克隆到該家族的BnNA5-3，并轉化了甘藍型油菜，結果表明該基因能增加轉基因油菜非生物逆境的抗性。主要結果如下:
　　 1.根據(jù)已知BnNA C5-7

2、基因的全長cDNA序列設計引物，用同源序列法克隆同源基因BnNAC5-3?？寺〉腂nNA C5-3全長899bp，編碼280個氨基酸，含有保守的NAC結構域。RT-PCR分析顯示BnNA C5-3受模擬干旱脅迫誘導，在20％ PEG(w/v)處理后0.5小時表達量達到最高。將BnNAC5-3基因CDS構建到pGBKT7載體后轉化酵母菌株AH109，BnNAC5-3可以激活報告基因的表達，具有轉錄激活功能。
　　 2.構建超表達載

3、體P35S∷BnNA C5-3，通過農桿菌介導轉化甘藍型油菜，經Kan篩選得到390棵轉基因植株，PCR鑒定出陽性單株35株，陽性率約為9％。轉基因T0代種子在10mg/LABA水溶液處理條件下，萌發(fā)率顯著低于對照;在100mg/L ABA的營養(yǎng)液培養(yǎng)條件下，轉基因T1代幼苗生長受抑制程度明顯高于對照;超量表達BnNAC5-3提高了植株的ABA敏感性。5％ PEG(w/v)水培液培養(yǎng)，對照先于轉基因T1代植株死亡。15％ PEG(w/v