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文檔簡介
1、該研究采用豇豆褪綠斑駁病毒作為研究對象.豇豆褪綠斑駁病毒是一個(gè)三分體正鏈RNA球形病毒.其基因組由RNA1（3.2kb)、RNA2（2.9kb）和RNA3（2.1kb）3條單鏈RNA所組成,采用RNA1、RNA2和RNA3接種植物合會(huì)產(chǎn)生一條編碼外殼蛋白的亞基因組RNA4.RNA1和RNA2都是單順反子,分別編碼病毒復(fù)制所需的109kD和94kD蛋白,RNA3是雙順反子,編碼負(fù)責(zé)細(xì)胞間運(yùn)動(dòng)的32kD蛋白（3a蛋白）及21kD外殼蛋白.病
2、毒的復(fù)制不需要3a蛋白和外殼蛋白,但在病毒的系統(tǒng)侵染中需要這兩種蛋白的參與,因此,豇豆褪綠斑駁病毒RNA3是研究RNA病毒重組的理想材料.該研究首先采用PCR點(diǎn)突變的方法,將連接于質(zhì)粒pBluescript(KS+/-)上的CCMV RNA3的cDNA克隆進(jìn)行點(diǎn)突變,并獲得TP7、TP8和AG1三種RNA3的突變體.進(jìn)一步以TP7+TP8、TP7+AG1和TP8+AG1混合接種植析中提取的病毒RNA為模擬,進(jìn)行RT-PCR,將產(chǎn)物克隆于
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