28705.家蠶emc蛋白的表達和功能分析_第1頁
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文檔簡介

1、浙江理工大學碩士學位論文家蠶emc蛋白的表達和功能分析姓名：楊慶申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：張耀洲20100301浙江理I：人學碩士學位論文AbStractextramacrochaetae(emc)isamemberoftheHelixLoopHelix(HLH)superfamilyItlacksthebasicregionthusisunabletobindDNAandisanegativeregulat

2、orofotherbHLHproteinsbyforminginactiveheterodimerswiththemTheBmemccDNAWas1619bpinlength，containinga429bpORFwhichencodeapolypeptideof142aminoacids；themolecularweightofthisproteinWasestimatedtobe1559kDWeobtainedtheORFofthe

3、BmemcfromthetotalcDNAofsilkwormpupabyPCRAfterbeingdigestedwithEcoRIandHindIII，theDNAfragmentWasinsertedintothefusionexpressionvectorpET28aTheresultsofPCRanddigestionshowedthatthetargetfragmentWaSinsertedcorrectlyTherecom

4、binantplasmidWastransformedintoEcoliBL21(DE3)AfterbeinginducedbyIPTGtherecombinantproteinWasexaminedbySDSPAGEThemostrecombinantproteinwasinsolubleinclusionbodyInordertoobtainabundantsolublerecombinantprotein，theinsoluble

5、inclusionbodywassolubilizedwith4MureaTherecombinantproteinWaspurifiedwithNiaffinitychromatographyThemolecularweightoftherecombinantproteinWascharacterizedbymass—spectrumafterbeingpurifiedwith10RIFPLCTheresultsindicatedth

6、atthemolecularoftherecombinantWas1928kD(HistagWasweightof369kD，andBmemcwasweightof1559kD)ThepurifiedrecombinantproteinwasusedtoimmunizeamaleNewZealandrabbitWehavedetectedtheexpressionofBmemcinmRNAandproteinlevelsTheresul

7、tsshowedthattheexpressionlevelWashighestinthetissuesoftestis，followedbytheovaryhead，midgutandtrachea；theproteinWasbarelydetectableintheMalpighianruble，silkglandandfatbodyBmemcishighlyexpressedinmoth，fifthinstarlarvaeandp

8、upabutlowerineggBombyxmoricelllineBin5WasculturedinTC100supplementedwith10％fetalbovineserumat27“(2WeblockedtheNotchsignalingpathwaywith1secretaseinhibitorinordertoexaminationtherelationshipbetweenBmemcandNotchsignalingpa

9、thwayTheresultsshowedthatthe7secretaseinhibitorscouldreducetheexpressionlevelofBmemcinBin5cellWeproposedthatBmemcwasregulatedbyNotchsignalingpathwayasatargetgeneKeywords：Bmemc；Notch；tissuelocalization；RTPCR；7secretaseinh

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