柑橘體細(xì)胞胚發(fā)生的細(xì)胞學(xué)及生理生化特性研究.pdf

1、湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文柑橘體細(xì)胞胚發(fā)生的細(xì)胞學(xué)及生理生化特性研究姓名：劉華英申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：植物學(xué)指導(dǎo)教師：肖浪濤20031101發(fā)生不同時(shí)期，蛋白質(zhì)組分無(wú)明顯變化，僅在表達(dá)量上有差異。4內(nèi)源激素水平和激素平衡對(duì)柑橘體胚發(fā)生起重要的調(diào)節(jié)作用。愈傷組織在長(zhǎng)期繼代培養(yǎng)過(guò)程中胚性能力的保持需要較高水平的cTK、1AA和ABA，GA3具有負(fù)作用。具有不同胚性能力的材料之間，隨著胚性能力的下降，其內(nèi)源CTK、IAA和ABA水平也下降，G

2、A3則升高。ABA與clx、MA之間的平衡使胚性愈傷組織在繼代培養(yǎng)時(shí)保持在胚性狀態(tài)，不向體胚發(fā)生方向進(jìn)行。分化培養(yǎng)后，GA3、IAA明顯降低，ABA明顯升高，形成AB～cTK和ABA，IAA峰值，有利于胚性能力的表達(dá)，形成多細(xì)胞原胚。2030d，較低水平的ABMAA比值和IA刖cTK水平的回升，導(dǎo)致球形胚難以進(jìn)一步發(fā)育和次生胚形成。體胚發(fā)生能力越弱的材料其內(nèi)源激素變化規(guī)律越接近非胚性愈傷組織。本研究還表明，IAA氧化酶活性與內(nèi)源№～代謝

3、密切相關(guān)；向培養(yǎng)基中釋放是內(nèi)源激素代謝的另一種途徑。此外，采用梯度洗脫在柑橘愈傷組織內(nèi)源激素的HPLC分析中的分離效果較好。5優(yōu)化了植物多胺的腫Lc測(cè)定條件，確定在37℃苯甲酰化反應(yīng)30Inin，檢測(cè)波長(zhǎng)230姍，流速O7m1mino效果最佳。在此基礎(chǔ)上，對(duì)柑橘愈傷組織內(nèi)源多胺進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)柑橘體胚發(fā)生能力與內(nèi)源多胺水平正相關(guān)，無(wú)體胚發(fā)生能力的非胚性愈傷組織內(nèi)源多胺水平低。分化培養(yǎng)早期，較高的Put及多胺含量的增加有利于柑橘體胚發(fā)生，