15110.重組抗人cd25單克隆嵌合抗體生產工藝及初步藥效學研究

1、分類號：&翌I密級：UDC：華東理工大學工程碩士學位論文重組抗人CD25單克隆嵌合抗體生產工藝及初步藥效學研究王琦指導教師姓名：郭美錦教授華東理工大學黃陽濱高級工程師上海新生源醫(yī)藥研究有限公司申請學位級別：碩士論文定稿日期：20121216學位授予單位：學位授予日期：工程領域：生物工程論文答辯日期：盤竺f!：!璺蘭華東理工大學答辯委膾搛t磊7c乙搬評閱人：％垓翻睦瞎秀舞南乙嘭秀臻而乙華東理工大學碩士學位論文第工頁重組抗人CD25單克隆嵌

2、合抗體生產工藝及初步藥效學研究摘要CD25(IL2Ra)單抗是T細胞活化的阻滯劑。T細胞膜表面的IL2R系由Q、B、Y三條肽鏈組成，其中缺乏胞漿區(qū)而無信號傳遞作用的0c鏈(又稱CD25)對第三信號中的IL2具有高度親和力。在靜止期的T細胞它不表達，初步活化的T細胞表達0c鏈后對IL2的親和力極強。CD25單抗則可阻止IL2R與IL2的結合，使T細胞不能由G1期進入S期，從而阻斷T細胞的完全活化和克隆增殖、防止排斥反應的發(fā)生。歐洲和美國進

3、行了大量的研究工作，開發(fā)了SimulectTM和ZenapaXTM等單克隆抗體作為免疫抑制藥物，它們的作用都是以抗CD25(IL2I№)的抗體的形式與活性的T細胞CD25高特異性結合，從而抑制IL2與其受體的結合，抑制移植排斥反應。本課題抗CD25的嵌合型單克隆抗體(Lotact1)作為一種大鼠IgG2b九1a單克隆抗體，通過基因工程方法保留鼠源性的單克隆抗體的可變區(qū)，用人抗體恒定區(qū)替代鼠源抗體恒定區(qū)組合成嵌合抗體，降低或避免了鼠源性單

4、克隆抗體在應用時的人抗鼠抗體(humaJlantimouseantibodyresponse，HAMA)反應。首先，通過基因工程方法分別構建了能表達抗體重鏈和輕鏈的重組質粒，MRC—VH和MRC—VL，然后將此表達載體分別電轉化至NS0細胞，轉化后的細胞經(jīng)培養(yǎng)能表達出新型抗器官移植排斥的嵌合單克隆抗體Lotact1。該單克隆抗體為人一鼠嵌合型單抗，有70％的成分與人源性單抗完全相同。此抗體應用于治療時，不但能夠保留鼠源性單克隆抗體的特異

5、性、親和力和細胞毒性，同時不會引起過敏反應，干擾治療效果。通過分子克隆、細胞表達、質量研究等分子生物學和藥學研究工作已基本建立了適合新藥研究生產要求的5L細胞反應器批次培養(yǎng)技術路線，抗CD25的嵌合型單克隆抗體(Lotact1)的平均表達量達108m∥L細胞懸液，每批次細胞懸液總收獲體積達4L。通過體外生物活性研究表明，Lotact。1對淋巴細胞的增殖具有抑制作用，初步藥效學研究證明，Lotact1能有效降低大鼠腎移植急性排異反應的發(fā)生