小麥全蝕病菌胞外β-1，3-葡聚糖酶Ⅱ的分離純化及性質(zhì)研究.pdf

1、　　小麥全蝕病是一種世界范圍內(nèi)普遍發(fā)生的重要根部病害和重點防治對象，給小麥生產(chǎn)帶來重大的損失。由于全蝕病的致病機理研究還很薄弱，加之目前尚無有效的抗性品種和化學藥劑，全蝕病的防治仍是小麥生產(chǎn)中的一大難題。　　小麥全蝕病菌致病機理的研究顯示，病菌侵染麥根的過程，不僅與纖維素酶和木聚糖酶等細胞壁降解酶有關(guān)，還可能涉及胞外β-1,3-葡聚糖酶。因此，本研究小組對小麥全蝕病菌胞外β-1，3-葡聚糖酶進行了系統(tǒng)研究，其目的是為進一步全面揭示小麥

2、全蝕病菌致病過程的細胞化學和分子生物學機理奠定基礎(chǔ)，同時也為進一步開展抗全蝕病的生物工程研究提供理論依據(jù)。本論文在課題組前期工作的基礎(chǔ)上，對全蝕菌產(chǎn)生的胞外β-1,3-葡聚糖酶同工酶進行了分離純化和酶學性質(zhì)研究，取得以下重要研究結(jié)果表明：　　1.硫酸銨梯度沉淀研究發(fā)現(xiàn)，55﹪飽和度的硫酸銨就基本可以將小麥全蝕病菌液體振蕩培養(yǎng)液中的目的蛋白全部析出?！　?.小麥全蝕病菌產(chǎn)生的胞外β-1，3-葡聚糖酶主要存在兩種同工酶(β-1，3-葡聚

3、糖酶Ⅰ和β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ)，并且β-1，3-葡聚糖酶Ⅱ的表達量相對較大，β-1，3-葡聚糖酶Ⅰ的表達量較小。　　3.粗酶液經(jīng)SephadexG-150凝膠過濾層析分離，出現(xiàn)兩個紫外光吸收峰，各收集部分酶活力也出現(xiàn)兩個主要吸收峰，根據(jù)各收集部分的酶活力大小及它們在層析圖譜上所出現(xiàn)的位置，證實粗酶液主要含有兩種β-1,3-葡聚糖酶同工酶?！　?.經(jīng)過非變性PAGE分離膠濃度的篩選，確定了達到兩種β-1，3-葡聚糖酶同工酶的最佳分離

4、效果的分離膠濃度為7.5﹪。　　5.電洗脫回收了經(jīng)非變性PAGE(分離膠濃度為7.5﹪、濃縮膠濃度為3.9﹪)分離的同工酶(表達量較大的GluⅡ)，經(jīng)電泳檢測達到電泳純?！　?.β-1，3-葡聚糖酶Ⅱ由兩個亞基組成，它們的分子量分別為63.2KD和73.7KD?！　?.β-1，3-葡聚糖酶Ⅱ的等電點為8.6?！　?.β-1，3-葡聚糖酶Ⅱ最適反應(yīng)溫約為50℃，在＜60℃時比較穩(wěn)定；最適反應(yīng)pH值5.0左右，pH4.0～7.0較穩(wěn)