豬圓環(huán)病毒2型感染對豬肺泡巨噬細胞功能的影響.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV2)是引起豬斷奶后多系統衰竭綜合征等相關疾病的重要病原.豬肺泡巨噬細胞(PAM)既是其重要靶細胞,又是重要的免疫細胞.該研究將PCV2 BF株經口、鼻接種40日齡健康仔豬,在接種后第3、7、14、21、42天收集PAM.通過測定感染后PAM的凋亡與吞噬功能、表面分子與抗原遞呈功能相關分子及細胞因子的表達動態(tài),從細胞、分子與基因水平系統分析了PCV2感染對豬肺泡巨噬細

2、胞功能的影響.用RT-PCR技術從PAM中擴增和克隆了豬抗原遞呈功能相關分子SAL-DM、CD80、CD86,和豬細胞因子IL-1β、TNF-α、IL-8、MCP-1、IL-18及GM-CSF.經測序鑒定后,利用反向PCR技術構建了相應的缺失cDNA競爭分子.通過競爭PCR方法,建立了各分子的標準競爭曲線,并得到其直線回歸方程.用流式細胞術和瓊脂糖凝膠電泳檢測PAM凋亡現象,EA花環(huán)試驗測定Fc受體數目,吞噬雞紅細胞試驗測定吞噬功能.結

3、果顯示在整個試驗期內均沒有觀察到PAM凋亡,表明PCV2感染不會誘發(fā)PAM凋亡.PAM的Fc受體和吞噬雞紅細胞數目在感染后7天內下降,之后基本恢復,表明PCV2感染豬的PAM吞噬和清除病原體的功能出現短暫下降.用流式細胞術測定PAM的MHC分子數,用定量競爭PCR技術檢測抗原遞呈功能相關分子SLA-DM、CD80和CD86基因的mRNA轉錄動態(tài).結果顯示SLA-DR分子陽性PAM數在PCV2感染后第3天時增加,隨后明顯下降,21天以后恢

4、復正常;而SLA ClassI分子一直沒有明顯變化;SLA-DM、CD80與CD86的mRNA含量變化趨勢相似,均是在感染后第3天時降到最低,7天時快速上升,21天以后基本恢復正常.MHC分子SLA-DR、抗原遞呈途徑中的重要伴侶分子SLA-DM和重要共刺激分子CD80與CD86等表達下調,表明PCV2感染豬的PAM抗原遞呈功能減弱.用定量競爭PCR技術檢測細胞因子IL-1β、TNF-α、IL-8、MCP-1、IL-10、IL-12p4

5、0、IL-18、GM-CSF等基因mRNA的表達動態(tài).結果顯示IL-10 mRNA在接種后7天內表達增加,14天以后恢復正常;IL-12p40、IL-18、GM-CSF和MCP-1 mRNA表達在接種后3天內急劇減少,之后增加,14天或21天時到達峰值,之后下降至恢復正常;IL-8 mRNA在接種后7天內明顯下降,14天時才急劇上升;TNF-αmRNA沒有明顯變化;而IL-1βmRNA在接種后14天內均維持高水平表達.細胞因子mRNA轉