Notch1-Jagged1(CD339)在腎移植受者外周血淋巴細胞及移植腎組織中的表達.pdf

1、目的和意義： 腎臟移植是臨床上治療終末期腎臟疾病的有效手段，但移植排斥反應仍是目前移植領域難以克服的重要問題，在同種異體腎移植中，急性排斥反應（Acute rejection，AR）是術后最常見的并發(fā)癥，它通常發(fā)生于術后3個月內，最常見于術后1～3周，術后幾年亦有發(fā)生。AR如果能得到早期診斷并正確治療的話，90%以上患者的排斥反應可被逆轉。AR是慢性排斥反應（Chronic rejection，CR）發(fā)生的高危因素，也是導致移植

2、物長期存活失敗和移植腎失去功能的最重要危險因素之一。急性排斥反應和急性腎小管壞死（Acute tubular necrosis，ATN）都是腎移植術后常見并發(fā)癥，兩者術后都是以少尿、無尿為主要特點，術后早期較難鑒別。因此，如何早期診斷急性排斥反應非常重要。移植腎穿刺活檢病理進行分型診斷是了解移植腎狀態(tài)的經(jīng)典指標，但其有創(chuàng)性及反復動態(tài)監(jiān)測的困難性限制了它的臨床應用。血肌酐升高作為排斥指標既不夠敏感，又缺乏特異性。因此，探索非侵入性急性排斥

3、反應診斷方法一直是腎移植臨床研究的熱點之一。 Notch信號通路是一個古老的信號傳導途徑，Notch信號是一組跨膜受體，Notch信號通路由Notch受體、Notch配體和CSL-DNA結合蛋白、其它的效應物、Notch的調節(jié)分子等組成。Notch受體最早發(fā)現(xiàn)于果蠅，因該基因的部分功能缺失會在果蠅翅膀邊緣造成一些缺刻（Notchs）而命名。哺乳動物中共發(fā)現(xiàn)4類Notch基因，編碼4種Notch受體，分別為Notch1～4。Not

4、ch的配體在哺乳動物中Notch配體共有5種，分別為Delta-like1、3、4和Jagged1、2，Notch的配體與其受體一樣均為跨膜蛋白。Jagged1（新近被命名為CD339）是存在于哺乳動物細胞膜上Notch受體的主要配體之一，為單次跨膜糖蛋白，表達于骨髓、胎兒肝基質細胞和胸腺上皮細胞等多種組織，參與調控許多組織的生長發(fā)育。 最近的許多研究提示，Notch信號在外周免疫系統(tǒng)的分化和調節(jié)中發(fā)揮作用。移植腎排斥反應發(fā)生時

5、，移植物作為同種異體抗原刺激機體免疫系統(tǒng)，引起Notch受體表達上調。Notch信號通路又通過一系列途徑促進淋巴細胞分化、增殖?；罨牧馨图毎置诩毎蜃?，進一步促進淋巴細胞增殖并產生免疫效應。研究表明，Notch信號可以通過調節(jié)淋巴細胞表面CD25的表達以及增強NF-kappaB的活性，促進IFNγ的分泌等途徑來促進淋巴細胞的增殖。Notch信號通路活化在細胞因子或CD分子分泌表達之前，因此與其他的檢測指標相比，Notch1受體表達水

6、平的檢測可能更有助于急性排斥反應的早期診斷。 本課題擬采用流式細胞術檢測Notch1/Jagged1在腎移植術后受者外周血淋巴細胞中的表達，并應用免疫組化SP法檢測各組移植腎組織中的Notch1/Jagged1蛋白表達，探討檢測外周血淋巴細胞中Notch1/Jagged1的有效性及實用性，并就Notch1/Jagged1在急性排斥反應的診斷及鑒別診斷中是否有意義以及對急性排斥的治療是否具有指導價值等方面展開一些探討和研究。

7、 方法： 1、選取2007年1月～2008年12月接受腎移植手術的患者，以術后早期（1個月內）發(fā)生急性排斥反應（AR）的患者15例為急性排斥組，同期術后急性腎小管壞死（ATN）6例為腎小管壞死組，同期術后順利恢復、腎功能穩(wěn)定的15例為腎功能穩(wěn)定組。采用流式細胞術檢測所有患者術前和手術后1d、3d、7d、14d以及急性排斥組和腎小管壞死組發(fā)?。òl(fā)生排斥或腎小管壞死）時及相應治療（抗排斥或血液透析等）后1d、3d、7d、14d的N

8、otch1/Jagged1的淋巴細胞陽性表達率，對比各組手術前后、發(fā)病前后以及AR患者抗排斥治療前后不同時間點間的Notch1/Jagged1表達差異。 2、選取2007年1月～2008年12月收治的晚期急性排斥反應（>1年）患者8例為急性排斥組，診斷為慢性移植腎腎病（CAN）的15例患者為慢性移植腎病組，同期本院就診行定期常規(guī)復查的腎移植術后腎功能正常穩(wěn)定的10例患者作為腎功能正常組。采用流式細胞術檢測患者外周血淋巴細胞的No

9、tch1/Jagged1表達，對比三組外周血的Notch1/Jagged1表達差異，再按不同的免疫抑制方案和慢性移植腎病者是否行血液透析分別進行分組對比，了解Notch1/Jagged1表達與免疫抑制方案及血液透析的關系。 3、2007年1月～2008年12月采集的腎組織標本分為以下三組：（1）、急性排斥組：15例，均為腎移植術后發(fā)生急性排斥反應時行移植腎穿刺獲取的患者移植腎組織；（2）、慢性移植腎腎?。–AN）組：15例，均為

10、腎移植術后發(fā)生慢性移植腎腎病患者的移植腎組織；（3）、正常對照組：10例，為正常腎組織，其中6例為外傷后行腎切除者，4例為腎癌根治術癌旁5cm以外正常組織石蠟標本。所有腎臟組織標本采用免疫組化SP法檢測組織中Notch1/Jagged1蛋白表達，對比各組Notch1/Jagged1的表達差異，并將急性排斥組和慢性移植腎病組按病理結果進行分級，對比不同病理分級間的Notch1/Jagged1表達差異，了解Notch1/Jagged1表達與

11、病理分級之間的關系。 4、統(tǒng)計學方法：采用SPSS13．0軟件包建立數(shù)據(jù)庫，計量資料采用均數(shù)±標準差（x±s）表示，以P<0．05為差異具有統(tǒng)計學意義。術后早期各組多時間點間的比較采用重復測量的方差分析，每個分組在不同時間點上的兩兩比較采用Bonferron法，同一時間點上不同分組之間的兩兩比較采用LSD法。術后晚期及移植腎組織兩組之間的比較采用獨立樣本t檢驗，急性排斥組抗排斥治療前后的比較采用配對樣本t檢驗，多組之間的比較采用

12、單因素方差分析（One-way ANOVA），組間兩兩比較采用LSD法。Notch1與Jagged1表達的相關性用Pearson相關分析，Notch1/Jagged1表達與病理分級的相關性用spearman相關分析。 結論： 1、腎移植術后早期急性排斥反應發(fā)生時外周血淋巴細胞表面Notch1/Jagged1表達水平顯著增高，檢測外周血淋巴細胞的Notch1/Jagged1表達水平有助于急性排斥反應的診斷。 2、急

13、性排斥反應經(jīng)抗排斥治療后，Notch1/Jagged1表達水平顯著下降，因此，測定外周血淋巴細胞的Notch1/Jagged1表達水平有助于急性排斥反應治療效果的動態(tài)監(jiān)測。 3、腎移植手術后ld時各組受者外周血Notch1/Jagged1表達水平均有升高，早期ATN患者外周血淋巴細胞的Notch1/Jagged1表達與腎功能穩(wěn)定患者無顯著性差異，但明顯低于急性排斥反應患者，對鑒別ATN和AR有一定幫助。 4、檢測腎移植晚

14、期受者外周血淋巴細胞的Notch1/Jagged1表達不能用于CAN的診斷，但仍有助于腎移植晚期受者急、慢性排斥反應的鑒別以及監(jiān)測抗排斥治療的效果。 5、CAN患者外周血淋巴細胞表面Notch1/Jagged1表達水平與免疫抑制方案及是否行血液透析無關。 6、急性排斥反應腎組織Notch1/Jagged1蛋白表達明顯高于正常腎組織和慢性移植腎腎病腎組織，提示移植腎組織Notch1/Jagged1蛋白表達可作為監(jiān)測移植腎形