家蠅胚胎細(xì)胞抗菌肽對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：用脂多糖（LPS）刺激家蠅胚胎細(xì)胞產(chǎn)生抗菌肽，提取抗菌肽，研究所提取的抗菌肽對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞（A375）和人髓樣白血病細(xì)胞（K562）的抑制作用。 方法：（1）應(yīng)用含20mg/L脂多糖的無血清M3培養(yǎng)基作用于處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的家蠅胚胎細(xì)胞16h，提取上清液中的抗菌肽。（2）將提取的抗菌肽用PBS配制成40、80、160、320、640μg/mL五個(gè)濃度組，分別作A375細(xì)胞和K562細(xì)胞的MTT實(shí)驗(yàn)，對(duì)照組采用等量PBS，觀

2、察抗菌肽對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞的抑制作用。同時(shí)以人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞作為正常對(duì)照組。（3）用MTT法對(duì)上述五種濃度作A375細(xì)胞和K562細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，正常組采用等量培養(yǎng)基。（4）用Annexin V—Fitc凋亡檢測(cè)試劑盒測(cè)定五種濃度的抗菌肽是否引起A375細(xì)胞和K562細(xì)胞的早期凋亡及其隨濃度變化時(shí)凋亡率的變化，正常對(duì)照組采用等量PBS和培養(yǎng)基。（5）流式細(xì)胞儀檢測(cè)五種濃度抗菌肽對(duì)A375細(xì)胞和K562細(xì)胞細(xì)胞周期及凋亡的影響，正常對(duì)照組

3、采用等量PBS和培養(yǎng)基。（6）流式細(xì)胞儀測(cè)定高三尖杉酯堿和家蠅胚胎細(xì)胞抗菌肽對(duì)K562細(xì)胞和人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的有效殺傷率。 結(jié)果：（1）抑菌實(shí)驗(yàn)顯示家蠅胚胎細(xì)胞抗菌肽對(duì)大腸桿菌有抑菌活性。（2）MTT法檢測(cè)顯示五種濃度抗菌肽對(duì)A375細(xì)胞和K562細(xì)胞均具有抑制作用，與正常對(duì)照組相比，差異有顯著性（P<0.05）。五種濃度抗菌肽對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞均無抑制作用，與正常對(duì)照組相比，差異無顯著性（P>0.05）。（3）在不同濃

4、度抗菌肽作用下，K562細(xì)胞和A375細(xì)胞的生長(zhǎng)受到明顯的抑制，藥物濃度越高、作用時(shí)間越長(zhǎng)，對(duì)細(xì)胞的抑制作用越強(qiáng)。（4）各濃度組抗菌肽對(duì)A375細(xì)胞和K562細(xì)胞的早期凋亡率無顯著性差異（P>0.05）。（5）抗菌肽引起A375細(xì)胞的G2/M期升高，高濃度組（>160μg/mL）可引起G0/G1期降低，PI明顯升高。對(duì)K562細(xì)胞S期的影響與正常對(duì)照組相比差異有顯著性（P<0.05）。各濃度組均可引起K562細(xì)胞的G0/G1期升高，細(xì)胞

5、增殖指數(shù)PI降低。與正常對(duì)照組相比，各濃度組引起的A375細(xì)胞和K562細(xì)胞細(xì)胞凋亡率差異無顯著性（P>0.05）。（6）對(duì)照組、高三尖杉酯堿組及家蠅胚胎細(xì)胞抗菌肽組對(duì)K562細(xì)胞的有效殺傷率分別為27.30%、80.48%和83.33%；對(duì)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的有效殺傷率分別為44.00%、84.78%和36.37%。 結(jié)論：（1）家蠅胚胎細(xì)胞抗菌肽對(duì)大腸桿菌具有抑菌活性。（2）家蠅胚胎細(xì)胞抗菌肽對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞A375和人髓