HSP70反義寡脫氧核苷酸促進MRC-5細胞衰老的實驗研究.pdf

1、【目的】通過人類HSP70(heatshockprotein70，熱休克蛋白70)反義寡脫氧核苷酸，阻斷MRC-5細胞(人胚肺二倍體成纖維細胞)HSP70蛋白表達，觀察不同時間點HSP70蛋白水平、細胞凋亡及G1期細胞比例的變化，探討HSP70與細胞衰老及細胞凋亡的關(guān)系。 【方法】1)根據(jù)不同OND(oligodeoxynucleotides，寡脫氧核苷酸)及脂質(zhì)體濃度設(shè)計ODN組、脂質(zhì)體組、ODN-脂質(zhì)體復(fù)合物組及空白對照組共

2、21個組別，用MTT法測定各處理方式對MRC-5細胞增殖的影響。 2)用第一步實驗確定的正義寡脫氧核苷酸和反義寡脫氧核苷酸(anti-senseoligodeoxynucleotides，AS-ODN)及脂質(zhì)體的最佳作用濃度分別轉(zhuǎn)染兩組細胞，于轉(zhuǎn)染后12小時、1天、3天和5天，用流式細胞儀、免疫熒光顯微鏡檢測HSP70蛋白的熒光強度、細胞凋亡及細胞周期。 3)設(shè)立正義、反義和空白對照三個組，分別于轉(zhuǎn)染后2天、4天和6天取

3、各組細胞爬片，行衰老相關(guān)的β半乳糖苷酶(senescence-associatedβ-Gal，SA-β-Gal)染色檢測藍染細胞。 【結(jié)果】1)各時間點反義組蛋白表達均低于正義組(P＜0.05)，且其抑制作用在轉(zhuǎn)染后12小時最強。反義和正義組細胞在轉(zhuǎn)染后均出現(xiàn)蛋白表達高峰，但反義組高峰(轉(zhuǎn)染后第1天)較正義組高峰(轉(zhuǎn)染后第3天)提前。 2)各時間點反義組細胞凋亡率均高于正義組(P＜0.05)，兩組細胞凋亡率均在轉(zhuǎn)染后第1