大黃素對白血病細胞株U937增殖、凋亡的影響及機制探討.pdf

1、目的:①研究中藥大黃素(Emodin)對人髓系白血病U937細胞株增殖、凋亡的影響。②觀察對U937細胞增殖、凋亡相關基因及蛋白表達的影響，探討其作用機制。③大黃素作用后對細胞P13K/Akt信號轉導通路中蛋白表達的變化。 方法:應用MTT法繪制細胞生長曲線；克隆形成試驗觀察大黃素對U937細胞增殖的影響；AO-EB熒光染色、線粒體膜電位檢測、DNA倍體分析及DNA凝膠電泳分析細胞凋亡及周期變化；流式細胞術測定大黃素作用前后ca

2、spase-3活性變化；RT-PCR檢測大黃素作用前后Bcl-2、Bax、h-TERT、pim-2、c-myc、TGF-β1、survivin、P21、Mcl-1、野生型P53基因mRNA表達水平的變化，蛋白印跡法(Western-Blot)檢測Bcl-2、Bax、h-TERT、cyclinDl、procaspase-3和PARP蛋白以及Akt、pAkt、NF-κB(p65)和pNF-κB(pp65)蛋白表達水平的變化。 結果:

3、細胞生長曲線及克隆形成實驗結果顯示大黃素能抑制U937細胞增殖，作用72dx時的半數(shù)抑制濃度(IC<,50>)約為30μM；U937細胞核內濃縮聚集的染色質、線粒體膜電位的改變、亞G1峰(凋亡峰)及DNA片段化的檢出證實大黃素能誘導U937細胞凋亡，并呈量效關系。大黃素作用后G0/G1期細胞比例較對照組增高，S期比例下降，且與藥物濃度呈正相關。大黃素作用后caspase-3活性增高，并呈時效關系。同時U937細胞Bcl-2、c-myc、

4、h-TERT、pim-2、Survivin基因mRNA表達隨著作用時間的延長而逐漸減少；Bax、野生型P53、P21、TGFl31基因mRNA表達隨著作用時間的延長而逐漸升高；mcl-1基因表達無明顯改變。Western-Blot的結果顯示Bcl-2、Bax、h-TERT、cyclinDl、procaspase-3、116KD的PARP、pAkt、NF-κB(p65)和pNF-κB(pp65)蛋白的表達水平均下降，并且隨作用時間延長，表

5、達下降更明顯；而PARP蛋白的85kd的裂解片段逐漸增高，Akt蛋白表達無明顯改變。 結論:大黃素可抑制U937細胞增殖，誘導其凋亡，在一定濃度范圍內呈劑量時間效應關系，并將細胞阻滯于G0/G1期，可能是通過下調Bcl-2、c-myc、h-TERT、pim-2、Survivin、procaspase-3、cyclinDl、PAkt、NF-κB(p65)、pNF-κB(pp65)mRNA和/或蛋白表達，上調Bax,野生型P53、P