新生大鼠缺氧缺血性腦損傷Trx、NOS與凋亡的關(guān)系及地塞米松干預(yù)效果.pdf

1、目的：制備新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(hypoxic-ischemic brain damage，HIBD)動(dòng)物模型，觀察缺氧缺血性腦損傷后不同時(shí)間腦細(xì)胞形態(tài)的變化、硫氧還蛋白(thioredoxin，Trx)的表達(dá)、一氧化氮合酶(nitricoxjde synthase：NOS)的合成和細(xì)胞死亡形式，探討Trx與細(xì)胞凋亡的關(guān)系，NOS與細(xì)胞凋亡的關(guān)系及Trx與NOS的關(guān)系，為缺氧缺血性腦病提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。觀察地塞米松對(duì)NOS、Trx

2、和凋亡的影響，以揭示地塞米松與Trx和NOS的相關(guān)性。 方法：7日齡SD大鼠45只，雌雄不限，體重12-18g，隨機(jī)分為9組，對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組和給藥組(每一組又細(xì)分為缺氧缺血后3h、24h和72h組，每組各5只)，實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物采用阻斷左頸總動(dòng)脈后置于含8％O<,2>的低氧環(huán)境中2小時(shí)，建立缺氧缺血性腦損傷動(dòng)物模型。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)取各組新生大鼠腦組織，通過HE染色和脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(terminal-deox

3、ynucleotidyl transferase mediated nick end labeling，TUNEL)在光鏡下觀察腦組織的病理改變，通過rtPCR測(cè)定Trx的表達(dá)，通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定NOS的含量，通過Tunel試劑盒測(cè)定細(xì)胞凋亡。給藥組于造模前24小時(shí)給予地塞米松腹腔注射。對(duì)照組麻醉切開頸部皮膚，不結(jié)扎左頸總動(dòng)脈。 結(jié)果：正常腦組織可以觀察到凋亡細(xì)胞，可以檢測(cè)到Trx和NOS，但無明顯時(shí)間變化規(guī)律。凋亡于缺氧缺

4、血后3小時(shí)升高，24小時(shí)達(dá)高峰，72小時(shí)下降，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Trx的表達(dá)也于缺氧缺血后3小時(shí)升高，24小時(shí)達(dá)高峰，72小時(shí)下降，與對(duì)照組比較這種差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。NOS的含量的變化趨勢(shì)與凋亡和Trx相同。凋亡、Trx和NOS之間無相關(guān)關(guān)系。地塞米松可以使凋亡減輕、Trx的表達(dá)和INOS的合成下降。 結(jié)論：NOS、Trx與凋亡均于缺氧缺血后3小時(shí)升高，24小時(shí)達(dá)高峰，72小時(shí)下降，為臨床干預(yù)時(shí)間和干預(yù)目標(biāo)提供了一定的