CD4+CD25+調節(jié)T細胞在葡萄膜炎患者中的表達及其意義的初步研究.pdf

1、目的：
　　葡萄膜炎是常見的眼科疾病，是一組可累及葡萄膜、視網(wǎng)膜、視網(wǎng)膜血管及玻璃體的炎性病變，常累及雙眼，易于反復發(fā)作，是致盲的常見疾病。由于其病因和發(fā)病機制復雜不清，目前尚無理想的治療方法。近年來，隨著分子生物學和免疫學的發(fā)展，人們日益認識到葡萄膜炎是一種器官特異性自身免疫病，越來越多的研究證實免疫學機制在其發(fā)病中占到重要作用。一般認為，多種葡萄膜炎被認為是針對特定眼部蛋白的抗原特異性T細胞介導的自身免疫反應，其中T細胞在葡萄

2、膜炎發(fā)病中可能起到中心作用。多種細胞因子如IFN-γ、TNF-α、IL-10、IL-1、TGF-β、趨化因子及其受體等也參與了葡萄膜炎的發(fā)病。但目前關于其具體發(fā)病機制研究還不是很清楚，進一步研究其免疫學發(fā)病機理并探討新的免疫學治療方法對于葡萄膜炎有重要意義。
　　CD4+CD25+調節(jié)性T細胞是調節(jié)性T細胞的亞群之一，可通過抑制自身反應性T細胞的免疫反應、抑制傳統(tǒng)T細胞的活化以及促進一些抑制性細胞因子的分泌等，在維持機自身免疫性疾

3、病的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。目前CD4+CD25+調節(jié)T細胞在葡萄膜炎中表達及作用的研究主要集中在在實驗性自身免疫性葡萄膜視網(wǎng)膜炎（EAU）動物模型中。多項研究表明，CD4+CD25+調節(jié)T細胞在EAU中發(fā)揮重要作用，過繼轉移這種細胞給EAU小鼠能起到治療作用，為葡萄膜炎的治療提供了一種新的思路。但是，目前有關CD4+CD25+細胞在葡萄膜炎患者中的表達及其作用研究較少。
　　因此，我們實驗旨在：1.通過檢測不同病情程度葡萄膜炎患者外

4、周血中CD4+CD25highTreg細胞的表達水平，初步探討CD4+CD25highTreg細胞在葡萄膜炎發(fā)病中的作用；2.通過同時檢測CD4+細胞胞內IFN-γ、TNF-α及IL-10細胞因子及其單個核細胞培養(yǎng)上清中細胞因子的表達，并分析其表達與CD4+CD25high調節(jié)T細胞表達的相關關系，進一步研究葡萄膜炎免疫學發(fā)病機理，并初步探討CD4+CD25highTreg細胞在葡萄膜炎的發(fā)病中可能起到調節(jié)作用的機理。
　　方法：

5、
　　1．選取正常健康對照16例及病情活動期葡萄膜炎患者30例，按照不同分類將其總結，并記錄血沉等炎癥指標，按照評分標準將病情評分。
　　2．用三色免疫熒光染色方法、流式細胞術分析，對葡萄膜炎患者及對照外周血細胞表面CD4、CD25、及CTLA-4的表達進行檢測，分析CD4+CD25hig在CD4+中表達比例及其CD4+CD25highCTLA-4+細胞的表達。而且，將其與不同類型、不同病情嚴重程度患者進行相關分析。

6、　　3．用細胞內免疫熒光染色、流式細胞術方法，檢測CD4+細胞內胞內因子IFN-γ、TNF-α及IL-10的表達，分析其相互之間、與病情嚴重程度及與細胞表面CD4+CD25high表達的相關性。并采用ELISA方法，檢測葡萄膜炎患者外周血單個核細胞培養(yǎng)上清中IFN-γ、TNF-α及IL-10的表達，分析其與病情嚴重程度及其細胞表面CD4+CD25high表達的相關性。
　　結果：
　　1．葡萄膜炎患者外周血中CD4+CD25

7、highT細胞的百分率與正常健康對照（8.56±4.22％vs.5.72±3.11％）相比，顯著升高(P=0.022)，而且與患者病情嚴重程度明顯正相關（P=0.007）。但不同類型葡萄膜炎患者之間表達無明顯差異（P>0.05）。另外，CD4+CD25highCTLA4+T細胞在葡萄膜炎患者外周血中比例較正常對照明顯升高（P=0.012）。
　　2．葡萄膜炎患者外周血中IFN-γ在CD4+T細胞中的表達陽性百分率為7.02±4.8

8、6％，與正常健康對照（4.19±3.38％）相比顯著升高(P=0.026)。葡萄膜炎患者外周血中TNF-α+細胞在CD4+T細胞中的表達陽性百分率為10.22±5.61％，較正常健康對照（6.75±4.18％）顯著升高(P=0.023)。IL-10+在葡萄膜炎患者CD4+細胞內表達比例較正常健康對照略高，但統(tǒng)計上無顯著性差異。
　　3．這三種胞內細胞因子在CD4+細胞內的表達與患者病情嚴重程度均有顯著相關性（P<0.05），而且相

9、互之間均明顯相關（P<0.05）。同時發(fā)現(xiàn)TNF-α、IL-10分別與CD4+CD25high在外周血的表達均有明顯相關性（P<0.05）。
　　4．ELISA方法發(fā)現(xiàn)葡萄膜炎患者外周血淋巴細胞分泌上清中IFN-γ、TNF-α的表達與正常健康對照相比均明顯升高（P<0.05），且與病情明顯有相關性（P<0.05）。IL-10雖在葡萄膜炎患者外周血單個核細胞培養(yǎng)上清中表達水平較健康對照略高，但無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　

10、　結論：
　　1.實驗發(fā)現(xiàn)：葡萄膜炎患者外周血中CD4+CD25high的比例顯著高于健康對照組，同時，與Treg細胞密切相關的CTLA-4同樣被發(fā)現(xiàn)在葡萄膜炎患者CD4+CD25highTreg細胞中高表達，初步提示CD4+CD25+Treg可能在葡萄膜炎的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用，并與疾病的活動密切相關。
　　2.建立細胞內胞內因子表達檢測體系，證實在葡萄膜炎患者外周血CD4+細胞中細胞因子IFN-γ、TNF-α表達較正常

11、健康對照升高，可能作為重要的致炎因子參與葡萄膜炎發(fā)病。葡萄膜炎患者外周血CD4+細胞內TNF-α和IL-10的表達與CD4+CD25+調節(jié)T細胞表達有一定相關性，也初步提示這些細胞因子與CD4+CD25high的關系，可能受其調控。
　　3.上述實驗體系的建立，為我們的進一步深入研究葡萄膜炎中CD4+CD25+調節(jié)T細胞的具體作用機理提供了很好的保障，其結果為進一步揭示葡萄膜炎的免疫學發(fā)病機理，并且進一步探討葡萄膜炎新的免疫學治療