間苯三酚對大鼠心臟缺血再灌注損傷保護作用及機制研究.pdf

1、研究背景：
　　 缺血-再灌注損傷(ischemia-reperfusion injury,IR)是指一定條件下恢復缺血區(qū)血液灌流后,組織器官的損傷未減輕反而加重的現(xiàn)象,是心肌梗死治療中普遍存在的問題。研究表明,氧化應(yīng)激是缺血再灌注損傷的主要機制之一。
　　 髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)是氧化應(yīng)激中極其重要的一種酶。MPO由活化的中性粒細胞、單核-巨噬細胞分泌,主要功能為催化H2O2生成氧化活性

2、更強的HOCl,增強機體氧化應(yīng)激水平。血管過氧化物酶(vascular peroxidase,VPO)是新近發(fā)現(xiàn)的存在于心血管系統(tǒng)的過氧化物酶家族成員。體外實驗證明VPO具有MPO類似的特性,能將H2O2轉(zhuǎn)化成為HOCl,推測其可能在氧化應(yīng)激中發(fā)揮重要作用。
　　 間苯三酚(Phloroglucinol)具有抗炎抗氧化作用,能抑制過氧化物酶活性,且能增加過氧化氫酶(catalase,CAT)--一種H2O2水解酶的活性。

3、　　 本實驗將探討間苯三酚對缺血-再灌注損傷的作用及機制。
　　 方法：
　　 缺血前30 min用間苯三酚15mg/kg或30mg/kg灌胃預處理大鼠,結(jié)扎左冠狀動脈前降支1h,再灌注3 h。實驗分為假手術(shù)組、缺血-再灌注組、缺血-再灌注+間苯三酚低、高劑量組以及溶媒對照組。TTC染色法測量心肌梗死面積；HE染色法檢測組織損傷情況；免疫組織化學方法檢測Caspase-3蛋白表達水平；TUNEL檢測心肌細胞凋亡情況；比

4、色法檢測血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、Caspase-3活性、血液、心肌組織中MPO活性及CAT活性；酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血漿及心肌組織MPO蛋白水平。
　　 H9C2心肌細胞株于95％N2、5％CO2、低氧培基缺氧24 h,然后改為95％空氣、5％CO2、常氧培基復氧12 h,復氧前給予濃度分別為10-10M、10-9M、10-8M的間苯三酚處理。實驗分為常氧組、低氧-復氧組、低氧-復氧+間

5、苯三酚低、中、高濃度組及溶媒對照組。Hoechst染色檢測心肌細胞凋亡；化學法檢測心肌細胞中VPO活性;RT-PCR檢測VPO1 mRNA表達。
　　 結(jié)果：
　　 結(jié)果表明,與假手術(shù)組比較,缺血-再灌注處理可導致危險區(qū)梗死面積比上升至43.5±3.7％伴CK活性增加,心肌細胞壞死、凋亡明顯增加,血液、心肌組織中MPO活性和含量均不同程度升高而過氧化氫酶活性顯著降低。間苯三酚預處理可顯著減少心肌細胞凋亡、縮小心肌梗死面積