中國百日咳鮑特菌分離株的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的：百日咳是由百日咳鮑特菌感染所引起的一種急性呼吸道傳染病，人群普遍易感，尤其以嬰幼兒多見。我國全細(xì)胞百日咳疫苗（whole-cell pertussis vaccine，WPV）的使用有近50年的歷史，而相關(guān)百日咳鮑特菌分子流行病學(xué)的研究資料較少，本實驗對近50年我國收集的百日咳鮑特菌進(jìn)行了分子水平研究，探討我國分離百日咳鮑特菌的分子流行病學(xué)特點(diǎn)，以便更好的監(jiān)控和預(yù)防百日咳。
　　 方法：對我國1953-2005年間分離的9

2、6株百日咳鮑特菌，進(jìn)行了百日咳鮑特菌的血清型和脈沖場凝膠電泳（PFGE）分析以及其主要毒力因子的基因序列測序，包括百日咳毒素S1亞基（ptxS1）、百日咳粘附素（prn）、氣管定居因子（tcfA）、凝集素2（fim2）和凝集素3（fim3）；同時與我國的疫苗生產(chǎn)菌株（CS，P3S10和18530）和世界衛(wèi)生組織（WHO）參考菌株18323株進(jìn)行比較。
　　 結(jié)合菌株分離時間，分析不同年代流行菌株的基因是否存在抗原漂移現(xiàn)象，血清型

3、分布特點(diǎn)和PFGE型別與基因型的關(guān)聯(lián)。分析百日咳疫苗使用前后流行菌株的基因型和血清型的差異。
　　 結(jié)果：血清型分析顯示96株臨床菌株中共有fim2，fim3，fim2&3三個血清型，fim2和fim2&3血清型菌株主要分布在90年代以前，在90年代后出現(xiàn)了fim3型。
　　 基因序列分析結(jié)果顯示五個抗原基因均存在多態(tài)性現(xiàn)象，pm基因包括6個基因型（pm1，prn2，pm3，pm7，pm10和prn11），ptxS1基因

4、包括4個基因型（ptxS1A，ptxS1B，ptxS1D和ptxS1E），tcfA基因包括4個基因型（tcfA1，tcfA2，tcfA5和tcfA9），fim2基因包括2個基因型（fim2-1和fim2-2）和fim3基因包括3個基因型（fim3A，fim3B和fim3A*）。
　　 臨床菌株中的prn基因型中prn1基因型最為常見，占81.3％，含prn2和prn3基因型菌株最初分別在2000和2003年分離獲得。含ptxS1

5、A基因型的菌株最初在1963年被分離，并且以后逐漸取代了在50年代的流行ptxS1B和ptxS1D基因型的菌株，到90年代以后所占比例已達(dá)到100％。
　　 研究結(jié)果顯示5個基因組合（pm/pxS1/tcfA/fim2/fim3），即1/A/2/1/A，1/B/2/1/A，7/D/2/2/A，2/A/2/1/13和3/A/2/1/A占所有基因組合的93.5％，這五個基因組合的菌株分別所占比例為60.4％、18.8％、8.3％、3

6、.1％和2.1％。其中被稱為舊型的基因組合1/B/2/1/A和7/D/2/2/A的菌株是50年代最流行的基因組合形式，與疫苗生產(chǎn)菌株基因組合一樣。到了60年代以后，1/A/2/1/A基因組合的菌株數(shù)量增多，含有這種基因組合的細(xì)菌逐漸成為主要的流行菌株，2000年后出現(xiàn)了和3/A/2/1/A基因型的菌株和2/A/2/1/B基因型的菌株，后者是目前國外研究中比較流行百日咳菌株的基因組合形式。
　　 通過PFGE分析顯示26個PFGE

7、譜型被鑒定，不同的年代流行著不同PFGE譜型的菌株，BPCH2和BPCH3譜型是50年代比較流行菌株主要的譜型所占比例為52％，我國的疫苗生產(chǎn)菌株（cs和P3S10）為BPCH2譜型，疫苗生產(chǎn)菌株18530為BPCH25譜型，在1963-2003年收集的菌株中有49株為BPCHl譜型，占所有研究菌株數(shù)量的51％，而此譜型的菌株主要都是prn1/pxS1A基因型的菌株，BPCH6譜型（擁有和BPCH1譜型相同的基因組合形式）的菌株分離于1

8、999年，并且在1999-2003年間所收集的菌株中所占比例達(dá)30.8％，聚類分析顯示PFGE譜型中ptxS1基因型從ptxA1B向ptxS1A基因型的過渡表現(xiàn)在聚類圖中。
　　 PFGE譜型與抗原基因組合prn/pxS1/tcfA/fim2/fim3相關(guān)聯(lián)，6個最常見的PFGE譜型中，除了BPCH1譜型中93.9％的菌株為基因組合形式1/A/2/1/A，其它的譜型100％對應(yīng)各自不同的基因組合。
　　 在1953-19